脊髓缺血再灌注損傷腰動脈模型建立及丹參酮ⅡA作用研究.pdf

1、目的:
　　 1、應(yīng)用血管鑄型技術(shù)分析供應(yīng)家兔脊髓組織的血管，夾閉家兔腰動脈建立脊髓缺血再灌注損傷模型，應(yīng)用數(shù)字減影技術(shù)進(jìn)行鑒定。
　　 2、應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分析丹參酮ⅡA的藥代動力學(xué)。
　　 3、探討丹參酮ⅡA對脊髓缺血再灌注損傷的作用以及其可能的機(jī)制。
　　 方法:
　　 1、實驗動物與分組:新西蘭家兔90只，雌雄不限，3個月月齡，體重為2.0±0.2kg，分為模型建立及鑒定組(n=12)，丹

2、參酮ⅡA藥代動力學(xué)實驗組(n=24)，機(jī)制探討組(n=54)。
　　 2、模型建立及鑒定:首先選取2只家兔做血管鑄型標(biāo)本，分析血管走型，接著隨機(jī)選擇10只分為夾閉腹主動脈:和夾閉腰動脈，腹主動脈組沿左腎動脈下方夾閉腹主動脈、腰動脈組夾閉L3-6腰動脈，分別于夾閉前、夾閉中、松開血管夾時做數(shù)字減影，并于術(shù)后0.5小時取家兔脊髓，做HE染色，分析圖片選取最佳動物模型。
　　 3、丹參酮ⅡA藥代動力學(xué)分析:隨機(jī)分為0.5h組、

3、1h組、4h組、8h組，各組6只家兔，首先各組均抽取空白腦脊液，然后沿耳緣靜脈注射丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液，并與給藥后0.5、1、4、8h再次抽取腦脊液，用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)檢測腦脊液中丹參酮ⅡA的含量。
　　 4、機(jī)制探討:54只家兔隨機(jī)分為假手術(shù)組6只，缺血組24只，丹參酮ⅡA組24只，假手術(shù)組只分離腰動脈，缺血組分離并夾閉腰動脈0.5h后松開動脈夾，丹參酮ⅡA組于術(shù)前0.5h沿耳緣靜脈注射丹參酮ⅡA磺酸鈉，分離并夾閉腰動脈0.5h

4、后再次注射丹參酮ⅡA磺酸鈉，以上各組在0.5、1、4、8h抽取血液后取L3-6段脊髓組織，抽取的血液加入含有抗凝劑的采血管中，用血液流變儀檢測全血粘度、毛細(xì)管血漿粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、紅細(xì)胞剛性指數(shù)、紅細(xì)胞變形指數(shù)、紅細(xì)胞電泳指數(shù);同一只家兔的脊髓組織分為兩段，一段固定于4％多聚甲醛中，用免疫組化定性檢測NF-κβ、VCAM-1，另一段凍存于液氮中，用酶聯(lián)免疫法定量檢測VCAM-1的含量。
　　 5、利用Spss16.0統(tǒng)計數(shù)據(jù)

5、、圖像處理系統(tǒng)分析處理圖片。
　　 結(jié)果:
　　 1、成功的建立及鑒定了腰動脈夾閉脊髓缺血再灌注損傷模型。
　　 2、給藥后2h和7h的腦脊液與空白腦脊液相比較有差異，2h給藥樣品保留時間為8.92分鐘，其分子量為399.2，7h給藥樣品保留時間為31.29分鐘，其分子量為419。
　　 3、脊髓缺血再灌注損傷后NF-κβ表達(dá)，同一時點免疫組化圖片中丹參酮ⅡA組表達(dá)最少，缺血組中表達(dá)最高;脊髓缺血再灌注損

6、傷后VCAM-1表達(dá)，假手術(shù)組相比，缺血組各時點VCAM-1表達(dá)顯著升高，在0.5h、1h、4h時差異非常顯著（p＜0.01），8h時具有差異性(p＜0.05);此外，丹參酮ⅡA組與缺血組相比，0.5h顯著降低(p＜0.01)，1h、4h、8h時降低且具有差異性(p＜0.05)。假手術(shù)組始終無陽性血管表達(dá)，0.5h缺血組、丹參酮ⅡA組亦無陽性血管表達(dá)，1h、4h、8h缺血組陽性血管表達(dá)率最高，其中1h、4h中丹參酮ⅡA組與缺血組相比較差

7、異顯著(p＜0.05)，8h差異非常顯著(p＜0.01);脊髓缺血再灌注損傷后血液流變學(xué)變化，缺血組各時點全血粘度在10 s-1、60 s-1、150 s-1升高，毛細(xì)管血漿粘度升高(p＜0.05或p＜0.01)。丹參酮組各時點毛細(xì)管血漿粘度、紅細(xì)胞聚集率、細(xì)胞剛性指數(shù)、變形指數(shù)降低極其顯著（p＜0.01）。
　　 結(jié)論:
　　 1、夾閉腰動脈模型精確可靠、缺血完好、可操作性強(qiáng)、排除了其它臟器缺血導(dǎo)致的影響，因此該模型可