斑馬魚(yú)(Danio rerio)特異性抗體IgM的母源性傳遞.pdf

1、母源性免疫是指母體通過(guò)胎盤(pán)、初乳或卵黃將有免疫活性的免疫因子傳遞給子代并在子代中發(fā)揮免疫作用的現(xiàn)象,是生命早期最重要的保護(hù)作用。在魚(yú)類中,先天性和適應(yīng)性免疫因子能由母體傳遞到子代。這些因子包括溶解酵素、補(bǔ)體因子、蛋白酶抑制劑、凝集素和IgM等。目前已在很多硬骨魚(yú)卵中發(fā)現(xiàn)了IgM,但卵中的IgM對(duì)胚胎是能否起到保護(hù)作用還存在爭(zhēng)議。本文擬分離和鑒定斑馬魚(yú)血清和卵中的IgM,并通過(guò)Western和ELISA技術(shù)研究斑馬魚(yú)IgM的母源性傳遞。<

2、br>　　 本文首先分離和純化了斑馬魚(yú)血清和卵中的IgM。利用葡萄球菌A蛋白(SPA)在PH8.0時(shí)具有與魚(yú)類免疫球蛋白IgM分子Fc段特異結(jié)合的性質(zhì),通過(guò)親和層析,分離和純化了斑馬魚(yú)血清和卵中的IgM,并優(yōu)化了純化過(guò)程中的具體細(xì)節(jié)。純化后的IgM經(jīng)親和層析圖譜和變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析,結(jié)果表明親和層析圖譜中只出現(xiàn)一個(gè)峰,說(shuō)明親和層析柱只與IgM結(jié)合,血清中IgM的重鏈分子量約為83 kDa,卵中IgM的重鏈分

3、子量約為90 kDa。
　　 其次,本文通過(guò)抗原免疫成體斑馬魚(yú),然后檢測(cè)免疫后斑馬魚(yú)血清和卵中IgM的水平變化,來(lái)研究母源性免疫因子IgM是否對(duì)子代具有保護(hù)作用。目前的研究已證實(shí)母體抗體能傳遞到卵。本研究中,成體雌性斑馬魚(yú)每隔十四天腹腔注射一次半抗原載體復(fù)合物(三硝基苯酚-牛血清白蛋白,TNP-BSA),共注射四次。通過(guò)對(duì)注射后斑馬魚(yú)血清和卵無(wú)細(xì)胞體系與正常魚(yú)的比較發(fā)現(xiàn)注射后斑馬魚(yú)無(wú)論是血清還是卵中總蛋白濃度都顯著上升,并且在進(jìn)

4、行卵無(wú)細(xì)胞體系western時(shí)發(fā)現(xiàn)注射組IgM含量明顯高于正常組,說(shuō)明免疫親魚(yú)有助于提高IgM在卵中的積累。
　　 免疫后的斑馬魚(yú)血清用ELISA方法能夠檢測(cè)到與TNP-BSA、BSA尤其是TNP-OVA有結(jié)合活性。與TNP-OVA有結(jié)合活性表明血液中產(chǎn)生了抗TNP抗體。通過(guò)ELISA分析發(fā)現(xiàn)卵中有TNP-OVA結(jié)合活性,而與OVA沒(méi)有結(jié)合活性,說(shuō)明卵提取物中含有抗TNP活性的抗體。這就證明了注射TNP-BSA后的斑馬魚(yú)母體抗T

5、NP特異性抗體能夠傳遞到卵并對(duì)后代有保護(hù)作用。研究中還發(fā)現(xiàn),免疫后的斑馬魚(yú)血清和卵中總蛋白含量會(huì)有所上升,Western分析發(fā)現(xiàn)免疫后斑馬魚(yú)卵提取物中IgM的含量顯著高于未經(jīng)免疫的斑馬魚(yú),說(shuō)明對(duì)斑馬魚(yú)的免疫可以提高母源性IgM的含量。
　　 母源性免疫不僅具有理論意義,而且在魚(yú)類養(yǎng)殖生產(chǎn)上也具有潛在的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。一直以來(lái),人們致力于通過(guò)增加卵中凝集素、溶菌酶或IgM含量來(lái)增強(qiáng)魚(yú)苗免疫力。本論文為通過(guò)親魚(yú)免疫來(lái)增強(qiáng)子代免疫力,進(jìn)