保護斑馬魚(Danio rerio)胚胎免受細菌感染的新型母源性LPS結合蛋白ZRANB2的鑒定.pdf

1、斑馬魚是研究母源性免疫的重要模式生物，已經逐漸成為人們進行免疫學研究的新寵。本文采用高通量分離的方法從斑馬魚胚胎提取液中分離得到一個LPS結合蛋白-ZRANB2。ZRANB2普遍存在于各種生物體中，但是其功能和作用機制所知甚少。本文對ZRANB2進行了生物信息學分析、表達模式分析、體內體外抗菌活性研究以及抗菌活性中心的探尋，初步證明ZRANB2是一個母源性免疫因子。
　　首先，本文分別在分子水平和蛋白水平，證明ZRANB2在斑馬魚

2、各組織中都有表達，卵巢中表達量最高，在胚胎發(fā)育早期ZRANB2也大量存在，這說明其確實為一母源性蛋白。其次，通過序列比對發(fā)現(xiàn)，斑馬魚ZRANB2與哺乳動物、鳥類、兩棲類和硬骨魚的ZRANB2的一致性在氨基酸水平達到79.2％，80.3％，80.6％和82.3％，這說明ZRANB2的序列比較保守。經三維結構預測得知，斑馬魚ZRANB2與人ZRANB2結構相似，都主要由β折疊片層組成。再次，體外功能驗證證明重組ZRANB2(rZRANB2)

3、作為模式識別受體可以識別細菌信號分子LPS，能與革蘭氏陰性菌大腸桿菌、鰻弧球菌和嗜水氣單胞菌結合，可以作為抗菌效應分子來直接殺死細菌。還對其體內活性進行了驗證，將rZRANB2用顯微注射技術注入斑馬魚早期胚胎可以顯著提高胚胎對斑馬魚病原菌嗜水氣單胞菌的抵抗能力，同時注入抗ZRANB2的抗體會讓抵抗力明顯地降低，而注入抗actin的抗體卻沒有此作用。最后，證明了Z1/37和Z11/37具有體外抗菌活性，將其注入胚胎也會提高胚胎對嗜水氣單胞