甲基睪酮(MT)對(duì)雌性及未性分化斑馬魚(yú)(Danio rerio)的影響.pdf

1、斑馬魚(yú)（Danio rerio）是一種典型的小型熱帶觀賞魚(yú)。由于其具有個(gè)體小、產(chǎn)卵多、發(fā)育快、體外受精、胚胎透明、易于觀察、飼養(yǎng)簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于發(fā)育生物學(xué)、遺傳學(xué)、環(huán)境毒理學(xué)、免疫學(xué)等學(xué)科，斑馬魚(yú)也因此成為研究背景最廣泛的脊椎動(dòng)物模式生物之一。本文以斑馬魚(yú)為研究對(duì)象，運(yùn)用組織學(xué)、毒理學(xué)及繁殖生物學(xué)等方法比較深入研究不同濃度乙醇和MT對(duì)斑馬魚(yú)成活率、生長(zhǎng)及性腺結(jié)構(gòu)的影響。
　　 采用波恩氏液固定、常規(guī)石蠟切片的方法觀察斑馬

2、魚(yú)卵巢結(jié)構(gòu)及發(fā)育情況。結(jié)果表明，斑馬魚(yú)卵巢為封閉型，分為左右大致對(duì)稱的一對(duì)，90日齡左右達(dá)到性成熟。成熟卵巢乳白色，卵巢內(nèi)充滿II-V時(shí)相的卵母細(xì)胞，80％以上體積被V時(shí)相卵母細(xì)胞所占據(jù)，與斑馬魚(yú)為典型的非同步型卵巢相適應(yīng)；II時(shí)相卵母細(xì)胞染色為深紫色，III時(shí)相卵母細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)放射膜，IV時(shí)相卵母細(xì)胞卵黃迅速堆積，V時(shí)相成熟卵母細(xì)胞呈游離狀態(tài)、細(xì)胞核消失。
　　 利用乙醇濃度梯度為0ml/L（對(duì)照）、0.50ml/L、1.00

3、ml/L、2.00ml/L、4.00ml/L、8.00ml/L的溶液孵化受精卵及飼養(yǎng)稚魚(yú)5d，得到受精卵孵化率分別為61％、59.5％、55％、40％、17.5％、10％；稚魚(yú)成活率分別為67.78 ％、66.84 ％、58.8 ％、47.68 ％、20.2 ％、12.3 ％，并在4ml/L以上組觀察到獨(dú)眼畸形、脊柱彎曲和死亡等現(xiàn)象。結(jié)果表明，0.50ml/L的乙醇濃度對(duì)受精卵孵化率及稚魚(yú)成活率與對(duì)照組差異不顯著，因此小于等于0.50m

4、l/L的乙醇溶液對(duì)斑馬魚(yú)是安全劑量。大于此劑量的乙醇則對(duì)孵化率、存活率有明顯影響。
　　 利用濃度梯度為0mg/L（對(duì)照）、1.00mg/L、2.50mg/L、5.00mg/L、10.00mg/L、20.00mg/L的甲基睪酮（MT）溶液孵化受精卵及浸泡孵化后10d的稚魚(yú)40d，孵化和飼養(yǎng)期間每3d采集孵化后12d以上稚魚(yú)固定切片觀察性腺發(fā)育。結(jié)果顯示，受精卵組的成活率分別為34.75％、33％、31％、23％、15.75％、9

5、.75％；雄性比分別為50.35％、56.89％、74.94％、93.61％、95.3％、0。稚魚(yú)最晚于35d時(shí)可以區(qū)分性別，成活率分別為74.92％、66.60％、62.15％、41.74％、24.39％、12.81％，雄性比率為49.61％、58.17％、78.23％、92.89％、98.75％、0。并隨著激素濃度的增高，各組體長(zhǎng)、體重均有所降低。由此表明MT對(duì)斑馬魚(yú)的生長(zhǎng)活力和成活率都有明顯的抑制作用；當(dāng)MT劑量達(dá)到10mg/L處

6、理魚(yú)卵和稚魚(yú)均會(huì)出現(xiàn)少量的不育個(gè)體，20mg/L 的MT為可誘導(dǎo)群體不育，利用MT浸泡法對(duì)斑馬魚(yú)進(jìn)行全雄控制的劑量應(yīng)在5~10mg/L之間。
　　 利用含MT0mg/kg（對(duì)照）、30mg/kg、60mg/kg、120mg/kg、240mg/kg、400mg/kg的飼料飼喂60日齡及經(jīng)產(chǎn)雌性斑馬魚(yú)30d，并于飼喂后進(jìn)行測(cè)交。結(jié)果顯示，60日齡組成活率分別為95％、90％、75％、55％、35％、70％，成熟度分別為0.1074、

7、0.0998、0.0756、0.0582、0.0386、0.0278；經(jīng)產(chǎn)組成活率分別為100％、95％、80％、55％、40％、65％，成熟度分別為0.2247、0.1905、0.1531、0.1210、0.0275、0.0407。隨著激素劑量的增加，斑馬魚(yú)的生長(zhǎng)受到明顯的抑制，但在400mg/kg組有明顯回升。MT對(duì)雌性斑馬魚(yú)產(chǎn)卵量、受精卵孵化率、生長(zhǎng)活力、成活率及成熟度都有明顯的抑制作用；400mg/kg處理雌性斑馬魚(yú)30d可產(chǎn)生

8、激素閹割。
　　 經(jīng)產(chǎn)雌性斑馬魚(yú)性腺切片觀察結(jié)果表明：隨著MT劑量的增加，各劑量組性腺的發(fā)育受到的抑制加深，卵巢結(jié)構(gòu)變化也明顯。30mg/kg組V時(shí)相成熟卵母細(xì)胞數(shù)量減少；60mg/kg組II時(shí)相以上卵母細(xì)胞所占面積減少為60％，120mg/kg組開(kāi)始觀測(cè)到明顯的卵母細(xì)胞退化過(guò)程，240 mg/kg組II時(shí)相以上卵母細(xì)胞僅占性腺內(nèi)10％左右，400mg/kg組性腺內(nèi)除少量退化中的II時(shí)相卵母細(xì)胞外，其他組織已難以確認(rèn)為卵巢。卵母