急性肝損傷早期診斷指標GSTA1的研究及保肝藥物初篩.pdf

1、隨著經(jīng)濟的發(fā)展，環(huán)境污染和食品藥品安全事件的頻頻高發(fā)，使肝臟疾病發(fā)病率呈逐年上升趨勢。肝損傷成為危害人類健康的重大疾病之一，急性肝損傷又是多種嚴重肝臟疾病發(fā)生、發(fā)展的始動環(huán)節(jié)和共同途徑。因此，尋找早期、具有特異性的急性肝損傷指標是本課題的研究目標。本試驗研究的GSTA1是Ⅱ相結合反應同功酶GST的一個亞型。在編碼的二聚體蛋白時，是機體抗氧化防御系統(tǒng)的重要組成部分?？梢源呋S多外源性化學物與GSH結合，促進其在細胞內降解清除，保護機體。明

2、確GSTA1在急性肝損傷中的變化將成為肝損傷標記物的一個全新的階段。本試驗在急性肝損傷的動物模型和肝損傷標記物的研究的基礎上，篩選化學性肝損傷的有效保肝藥物，為藥物性肝損傷和酒精性肝損傷保肝藥物的篩選奠定了基礎。
　　 本試驗選用雄性昆明小鼠為實驗動物，研究四氯化碳(CCl4)所致急性化學性肝損傷、醋氨酚(APAP)所致小鼠急性藥物性肝損傷、乙醇所致小鼠急性酒精性肝損傷GSTA1與ALT在時間-效應和劑量-效應上的關系。在本實驗

3、室前期研究建立的三種急性肝損傷模型的基礎上，選定時間-效應和劑量-效應點，通過對GSTA1含量變化和ALT活性變化，進行綜合評價分析。GSTA1含量檢測原理為ELISA法，采用小鼠GSTA1試劑盒進行;ALT活性檢測是通過比色法，用谷丙轉氨酶試劑盒進行檢測。在此基礎上通過三種藥物的作用效果確定急性化學性肝損傷的保肝藥物，以血清轉氨酶(ALT、AST)、肝組織生化指標(SOD、MDA、GSH、GSH-Px)、GSTA1的活性和含量分析進行

4、評價。篩選出的有效藥物，以血清轉氨酶(ALT、AST)、肝組織生化指標(SOD、MDA、GSH、GSH-Px)、GSTA1的活性和含量及肝臟病理組織學進行綜合分析評價，確定最佳用藥劑量。
　　 研究結果表明:
　　 1.化學性急性肝損傷:在時間-效應試驗中，經(jīng)CCl4口服處理6h，GSTA1含量變化與對照組相比差異極顯著(P＜0.01);經(jīng)CCl4口服處理16h，ALT活性變化與對照組相比差異顯著(P＜0.05); GS

5、TA1含量變化和ALT活性變化在24 h達到最大值，之后呈現(xiàn)下降趨勢。在劑量-效應試驗中，當CCl4濃度為0.125％時，GSTA1含量變化與對照組相比差異極顯著(P＜0.01);當濃度為0.3％時，ALT活性變化與對照組相比差異極顯著(P＜0.01)。
　　 2.藥物性急性肝損傷:在時間-效應試驗中，經(jīng)APAP口服處理2h，GSTA1含量變化與對照組相比差異極顯著(P＜0.01); ALT活性變化與對照組相比差異極顯著(P＜0

6、.01)的時間點出現(xiàn)在經(jīng)APAP口服處理8 h;12 hGSTA1與ALT的變化量都達到最大值，之后呈現(xiàn)下降趨勢。在劑量-效應試驗中，當APAP給藥劑量為100 mg·kg-1時，GSTA1含量變化與對照組相比差異極顯著(P＜0.01);當給藥劑量為200 mg·kg-1時，ALT活性變化與對照組相比差異極顯著(P＜0.01)。
　　 3.酒精性急性肝損傷，在時間-效應試驗中，經(jīng)酒精口服處理2h，GSTA1含量變化與對照組相比差

7、異極顯著(P＜0.01);經(jīng)酒精口服處理8h，GSTA1與ALT的變化量都達到最大值，之后GSTA1含量變化呈現(xiàn)下降趨勢，ALT活性變化在12h又出現(xiàn)了一個峰值。在劑量-效應試驗中，當酒精劑量為10 mL·kg-1時，GSTA1含量變化與對照組相比差異極顯著(P＜0.01);當給酒精劑量為14 mL·kg-1時，ALT活性變化與對照組相比差異極顯著(P＜0.01)。
　　 4.三種藥物保護作用的試驗中，通過血清轉氨酶、肝組織生化

8、指標及GSTA1的含量和活性進行分析。與對照組相比:模型組差異極顯著(P＜0.01)說明模型建立成功;白芍總苷組和葡萄籽組差異極顯著(P＜0.01)，表明兩種藥物不能起到很好的保護作用;而龍葵組差異不顯著(P＞0.05)，且與陽性藥物組相比無顯著差異。因此在三種藥物保護作用的試驗中確定龍葵為最佳藥物。
　　 5.龍葵最佳劑量確定試驗中，通過血清轉氨酶、肝組織生化指標、GSTA1的含量和活性及病理切片進行分析。與對照組相比:龍葵中

9、、低劑量組差異極顯著(P＜0.01);而龍葵高劑量組差異不顯著(P＞0.05)，且與陽性藥物組相比無顯著差異。因此確定了龍葵的最佳劑量為150 mg·kg-1。
　　 本試驗說明了在急性肝損傷模型中，GSTA1的含量變化在肝損傷早期、低濃度時就可檢測出來。作為肝損傷標記物，GSTA1比ALT更準確、敏感。因此，GSTA1可作為肝損傷的早期診斷指標。同時本試驗篩選出了急性化學性肝損傷的有效藥物龍葵并確定了最佳劑量，為其他兩組急性模