新型電化學DNA傳感器用于結(jié)核分枝桿菌及其耐藥基因檢測的實驗研究.pdf

1、耐藥結(jié)核分枝桿菌，尤其是耐多藥結(jié)核分枝桿菌的出現(xiàn)給結(jié)核病的檢測和治療帶來了巨大的挑戰(zhàn)，對人類健康產(chǎn)生了極大威脅。目前臨床上常用的結(jié)核病的檢測方法分別存在操作繁瑣、儀器昂貴、耗時較長及易污染等不足。電化學DNA傳感器是近幾年發(fā)展起來的一種新型生物傳感器，因其簡單、靈敏、特異性強、易微型化等特點受到研究者的青睞，已被應用于多個領(lǐng)域的研究。然而電化學DNA傳感器易受其他因素的干擾造成結(jié)果不穩(wěn)定。實驗前期構(gòu)建的BSA單分子層控制組裝界面為基礎(chǔ)的

2、電化學DNA傳感器，有效地提高了體系的穩(wěn)定性。本文在前期研究基礎(chǔ)上，構(gòu)建了一種新型檢測體系，即用于耐多藥結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測的雙通道電化學DNA傳感器，同時對其特異性、靈敏性等性能進行了研究。此外，將新型生物傳感器用于結(jié)核分枝桿菌標本耐藥性的檢測，結(jié)果表明，生物傳感器能夠有效避免其他雜質(zhì)的影響，實現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌耐藥性檢測。
　?。ㄒ唬┮訠SA單分子層控制組裝界面為基礎(chǔ)，構(gòu)建雙通道電化學DNA傳感器，用于耐多藥結(jié)核分枝桿菌耐藥基

3、因的快速檢測。在組裝界面分別組裝兩套不同的探針序列，識別不同的目標分子，信號探針標記生物素或鏈霉親和素，通過生物素-鏈霉親和素的相互作用在電極表面組裝酶分子，安培法檢測酶催化相關(guān)氧化還原反應，能夠?qū)崿F(xiàn)不同目標序列的同時檢測。對雙通道DNA傳感器性能研究，表明該雙通道DNA傳感器具有較好的特異性和靈敏性，能夠區(qū)分單堿基錯配序列，對rpoB，katG，inhA三種耐藥基因的檢測限分別為4.33×10-12mol/L，3.28×10-12mo

4、l/L，4.02×10-12mol/L。該雙通道生物傳感器不僅具有操作簡單、低花費、靈敏度高、穩(wěn)定性好、易微型化等特點，還能有效縮短檢測時間，為結(jié)核病的診治提供快速有效的依據(jù)。
　　（二）新型電化學DNA傳感器用于耐多藥結(jié)核分枝桿菌臨床標本的檢測。設(shè)計相應的引物擴增包含常見耐藥基因突變位點的相應基因序列，新型電化學DNA傳感器檢測體系檢測PCR擴增產(chǎn)物。由于PCR擴增產(chǎn)物處于雙螺旋狀態(tài)，在進行電化學檢測時，雜交反應之前要進行變性過