用于乳腺蛋白標志基因檢測的DNA電化學(xué)生物傳感器的研究.pdf

1、乳腺癌是一種嚴重危害女性身心健康的常見惡性腫瘤，其發(fā)病率每年快速遞增，而乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致乳腺癌病人死亡的主要原因。乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移診斷的特異性標記物為乳腺蛋白標志基因，通過對其診斷可為臨床乳腺癌轉(zhuǎn)移早期監(jiān)測、治療提供科學(xué)的研究基礎(chǔ)，具有十分重要的學(xué)術(shù)創(chuàng)新性和臨床應(yīng)用前景。DNA電化學(xué)生物傳感器是當前生物基因檢測技術(shù)的前沿研究，具有快速、靈敏、準確、簡便經(jīng)濟等特點，在分子生物學(xué)和生物工程醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用前景。
　　 本論

2、文利用基于偶聯(lián)活化劑技術(shù)的共價鍵合法，將乳腺蛋白標志單鏈DNA序列探針固定到電極表面，再利用電化學(xué)交流阻抗檢測技術(shù)進行DNA雜交前后電信號的檢測，并對檢測的實驗條件進行了優(yōu)化，構(gòu)建了基于DNA電化學(xué)生物傳感器的乳腺蛋白基因檢測新方法。實驗結(jié)果表明，用十二烷基磺酸鈉(SDS)作為非特異性吸附去除劑，能夠有效的去除單或雙鏈DNA在電極表面的非特異性吸附。在SDS的最佳洗脫時間為3 min，探針固定最佳時間為30min，雜交最佳的溫度和時間分

3、別為37℃和20min的優(yōu)化實驗條件下，利用電化學(xué)交流阻抗檢測技術(shù)測得乳腺蛋白標志基因在1.0x10-9～2.0x10-8mol/L的濃度范圍內(nèi)與檢測響應(yīng)信號呈良好的線性關(guān)系(r=0.9992)，檢測限為5×10-10(S/N=3)，從而實現(xiàn)對乳腺蛋白標志基因的準確靈敏測定，
　　 此外，該方法對臨床乳腺癌實際樣本進行了初步實驗，并與傳統(tǒng)檢測乳腺蛋白標志基因的PCR凝膠電泳方法進行對照試驗研究。從臨床實際陽性樣本中提取的mRNA