構(gòu)建新型電化學(xué)DNA傳感器檢測結(jié)核分枝桿菌的研究.pdf

1、結(jié)核分枝桿菌DNA的檢測是檢測結(jié)核分枝桿菌，診斷結(jié)核病的重要方法。傳統(tǒng)檢測結(jié)核菌的方法，主要包括PCR，LAMP等，但他們具有一定的局限性，不能滿足結(jié)核病的快速，準(zhǔn)確的檢測。電化學(xué)DNA傳感器作為一種新型的核酸檢測手段，具有優(yōu)異的選擇性，高靈敏度，便攜性和低成本的特點，具有廣闊的實驗和臨床應(yīng)用前景。為了進(jìn)一步考察驗證電化學(xué)傳感器對于結(jié)核分枝桿菌檢測的潛力，構(gòu)建了基于結(jié)核特異性DNA片段的生物傳感器。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴構(gòu)建

2、了一種用于檢測結(jié)核分枝桿菌特異性核酸序列（IS6110）的“三明治夾心型”DNA電傳感器。使用具有良好的電化學(xué)活性物質(zhì)聚苯胺-石墨烯（PANI-rGO）納米復(fù)合物作為新的氧化還原納米探針，用于產(chǎn)生電流響應(yīng)信號。然后，納米金膠體顆粒（AuNPs）修飾在PANI-rGO納米復(fù)合材料表面，用于固定信號探針以形成示蹤劑標(biāo)記。在捕獲探針，目標(biāo)DNA，示蹤劑標(biāo)記物上的“三明治”雜交反應(yīng)之后，可以觀察到有區(qū)別的檢測電流信號。該生物傳感器可以在1.0×

3、10-13-1.0×10-8 M的線性范圍內(nèi)，檢測結(jié)核分枝桿菌特異性的IS6110核酸序列，相關(guān)系數(shù)為0.9976，最低檢測限達(dá)到5×10-14 M（S/N=3），實現(xiàn)了對結(jié)核分枝桿菌的超靈敏檢測。⑵為了評估該傳感器能否用于實際臨床檢測，對臨床肺結(jié)核病人與非肺結(jié)核病人的痰液的PCR產(chǎn)物樣本進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)該方法對于非肺結(jié)核病人的痰液標(biāo)本幾乎沒有電流響應(yīng)，而對于肺結(jié)核病人的痰液具有高的電流響應(yīng)，這與PCR的結(jié)果一致。證明該方法能夠檢測臨床標(biāo)