約氏瘧原蟲(chóng)感染TLR2-TLR7活化效應(yīng)特點(diǎn)的研究.pdf

1、目的:瘧原蟲(chóng)為單細(xì)胞寄生生物。當(dāng)瘧原蟲(chóng)感染宿主時(shí)，TLRs可識(shí)別瘧原蟲(chóng)的病原相關(guān)的模式分子(PAMP)，將把病原入侵的信息傳遞給機(jī)體，激活免疫系統(tǒng)發(fā)揮抵抗感染作用，是機(jī)體抵御感染性病的第一道保護(hù)屏障。研究表明，TLR2在瘧疾感染過(guò)程中，它能識(shí)別瘧原蟲(chóng)的磷脂酰肌醇(PI)，主要表達(dá)于髓樣樹(shù)突狀細(xì)胞(mDC)。TLR7具體識(shí)別瘧原RNA，主要表達(dá)在漿樣樹(shù)突狀細(xì)胞(pDC)，TLR7被其配體激活后，通過(guò)下游接頭蛋白分子MyD88將激活信號(hào)向下

2、游傳遞，最終激活轉(zhuǎn)錄因子NF-κ B，從而產(chǎn)生多種促炎性細(xì)胞分化，參加體液免疫或細(xì)胞免疫應(yīng)答。TLR2、TLR7其激活能夠活化樹(shù)突狀細(xì)胞(Dendritic Cells，DC)，上調(diào)細(xì)胞表面分子如共刺激分子和MHCⅡ類分子的表達(dá)，同時(shí)抑制DC的凋亡?！禢ature》刊發(fā)的文章已明確證實(shí)，DC實(shí)現(xiàn)對(duì)T細(xì)胞的激活效應(yīng)主要取決于TLRs的存在，DC正是決定Th細(xì)胞應(yīng)答形式、強(qiáng)度和效應(yīng)的關(guān)鍵因素，TH1、TH2、TFH細(xì)胞能有效遏制寄生蟲(chóng)感染，

3、它們分別在瘧疾感染不同階段發(fā)揮效應(yīng)，其中感染早期建立的TH1型細(xì)胞免疫應(yīng)答可顯著提高吞噬細(xì)胞的吞噬能力和殺傷活性，進(jìn)而控制病原蟲(chóng)的指數(shù)性增殖，隨后，TFH、TH2細(xì)胞不僅輔助B細(xì)胞活化、成熟增殖并產(chǎn)生特異性抗體可有效滅除病原體，還可促進(jìn)B細(xì)胞分化為記憶B細(xì)胞(Bm)。本研究通過(guò)創(chuàng)建約氏瘧原蟲(chóng)Plasmodiumyoelii感染BALB/c小鼠模型，觀察瘧疾感染早期CD4+T細(xì)胞及其亞群的活化狀況、應(yīng)答模式以及感染后期抗體的分泌水平以及記

4、憶性T、B細(xì)胞的增殖情況，明確TLRs介導(dǎo)DC調(diào)控免疫記憶建立和維持的作用機(jī)制，以期為研制開(kāi)發(fā)有效的瘧疾疫苗提供新的靶點(diǎn)和思路。
　　研究方法:創(chuàng)建約氏瘧原蟲(chóng)Plasmodiumyoelii感染BALB/c小鼠的模型，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)、real-time PCR、Elisa方法觀察瘧疾感染早期CD4+T細(xì)胞及其亞群的活化狀態(tài)、應(yīng)答模式以及感染后期抗體的分泌水平及記憶性T、B細(xì)胞的增殖情況，明確TLRs介導(dǎo)DC調(diào)控免疫效應(yīng)的維持和建立

5、的作用及其原理。
　　結(jié)果:1、在P.y17XNL感染BALB/c小鼠模型中，TLR2激動(dòng)劑Pam3CSK4可通過(guò)活化DC增強(qiáng)感染早期TH1、TFH型保護(hù)性免疫效應(yīng)，從而使感染小鼠原蟲(chóng)血癥水平降低，而未活化TH2型及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)引起的免疫應(yīng)答。在感染10天后，可以促進(jìn)記憶性T細(xì)胞、記憶B細(xì)胞的增殖，但與對(duì)照組相比無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2、在P.y17XNL感染BALB/c小鼠模型中，TLR7激動(dòng)劑Loxorbine可通過(guò)活

6、化DC增強(qiáng)感染早期TH1、TH2、TFH型保護(hù)性免疫應(yīng)答，從而使感染小鼠原蟲(chóng)血癥水平降低，而對(duì)Treg細(xì)胞數(shù)量影響不大。在感染10天后，可以促進(jìn)記憶性T細(xì)胞、記憶B細(xì)胞的增殖，但與對(duì)照組相比無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:在P.y17XNL感染BALB/c小鼠模型中，TLR2激動(dòng)劑Pam3CSK4、TLR7激動(dòng)劑Loxorbine可通過(guò)誘導(dǎo)DC活化，促進(jìn)有效的TH1、TFH免疫效應(yīng)，在感染早期發(fā)揮保護(hù)性免疫作用，并降低原蟲(chóng)血癥水平。