間日瘧原蟲感染免疫應(yīng)答特征的研究.pdf

1、目的：
　?。?）了解間日瘧原蟲現(xiàn)癥感染者外周血細(xì)胞免疫表型變化特征；
　?。?）觀察間日瘧原蟲抗原誘導(dǎo)的間日瘧原蟲現(xiàn)癥感染者PBMC的增殖和凋亡；
　　（3）了解IFN-γ、TGF-β1在間日瘧原蟲感染免疫中的作用；
　?。?）探討間日瘧原蟲感染引起的抗間日瘧原蟲粗制抗原（P.vAg）、抗P.vMSP-1（19）、抗P.vAMA-1、抗惡性瘧原蟲粗制抗原（P.fAg）、及抗正常紅細(xì)胞膜抗原（NRBCAg）IgG

2、抗體水平變化特征。
　　方法：
　?。?）用流式細(xì)胞儀檢測44例間日瘧原蟲現(xiàn)癥感染者（AC組）、18例既往感染者（IC組）、24例正常對(duì)照（NC組）外周血CD3+CD4+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞、γδT細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、CD4+記憶性 T細(xì)胞（CD4+CD45RO+T），早期CD4+記憶性T細(xì)胞（CD4+CD45RO+CD27+T），CD8+T記憶性細(xì)胞（CD8+CD45RO+T），早期 CD8+記憶

3、性 T細(xì)胞（CD8+CD45RO+CD27+T），CD4+CD25+T細(xì)胞及其表達(dá)FoxP3細(xì)胞的百分含量；
　　（2）利用3H-TdR摻入法觀察5例間日瘧原蟲現(xiàn)癥感染者PBMC在間日瘧發(fā)病時(shí)（week0）、發(fā)病后第1周（week1）、發(fā)病后第2周（week2）與P.vAg、P.fAg、NRBCAg及 OKT3共培養(yǎng)時(shí)增殖活性的動(dòng)態(tài)變化；
　?。?）用 Annexin-V-FITC與CD3-APC、CD4-PECy5.5、C

4、D8-PE、CD19-PECy5.5單克隆抗體聯(lián)合使用測定7例瘧原蟲現(xiàn)癥感染者 PBMC與 PvAg和 NRBCAg共培養(yǎng)時(shí) CD3+CD4+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞及B細(xì)胞凋亡的百分率；
　?。?）用ELISA法檢測30例間日瘧原蟲現(xiàn)癥感染者及15例正常對(duì)照血漿IFN-γ、TGF-β1水平，同時(shí)檢測12例間日瘧原蟲現(xiàn)癥感染者及6例正常對(duì)照人群PBMC與P.vAg、NRBCAg及OKT3共培養(yǎng)時(shí)上清中IFN-γ、TGF-β1

5、水平。此外，觀察了5例間日瘧原蟲現(xiàn)癥感染者PBMC在week0、week1、week2與P.vAg、P.fAg、NRBCAg及OKT3共培養(yǎng)時(shí)上清中IFN-γ、TGF-β1水平；
　?。?）采用ELISA法測定77例瘧原蟲現(xiàn)癥感染者、32例既往感染者、20例正常人群血漿抗P.vAg、抗P.vMSP-1（19）、抗P.vAMA-1、抗P.fAg、及抗NRBCAgIgG抗體水平。
　　結(jié)果：
　?。?）AC組、IC組及NC

6、組外周血細(xì)胞免疫表型：AC組NK、NKT及CD8+T細(xì)胞百分含量（分別為9.87％、3.11%及24.46%）明顯低于IC組（16.70%、4.68%及28.92%）及NC組（14.37%、4.43%及30.77%）（P均＜0.05）；但AC組γδT、CD4+記憶性T、CD8+記憶性T及CD4+CD25+T細(xì)胞百分含量（4.79%、25.13%、18.52%及4.83%）明顯高于IC組（3.04%、20.00%、13.48%及3.16%

7、）及NC組（3.29%、16.60%、13.27%及2.41%）（P均＜0.05）；AC組早期CD4+記憶性T及早期 CD8+記憶性 T細(xì)胞百分含量（77.85%及79.67%）亦明顯高于 NC組（63.60%及59.46%）（P均＜0.05）；AC組CD4+T細(xì)胞、CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞與 B細(xì)胞的百分含量與 IC組及 NC組相比，差異無顯著性（P均＞0.05）；
　　（2）間日瘧原蟲現(xiàn)癥感染者 PBMC體外增殖的

8、動(dòng)態(tài)變化：AC組 P.vAg刺激孔PBMC在發(fā)病時(shí)的CPM值明顯高于發(fā)病后1周及發(fā)病后2周（P均＜0.05），且在發(fā)病時(shí)和在發(fā)病后2周，AC組P.vAg刺激孔的CPM值明顯高于NRBCAg刺激孔及P.fAg刺激孔（P均＜0.05）；而在發(fā)病后1周，AC組P.vAg刺激孔的CPM值與NRBCAg刺激孔及P.fAg刺激孔之間差異無顯著性（P均＞0.05）；
　?。?）間日瘧原蟲現(xiàn)癥感染者 PBMC細(xì)胞亞群的凋亡：間日瘧原蟲現(xiàn)癥感染者外

9、周血CD3+CD8+T細(xì)胞 P.vAg刺激孔的凋亡率（55.16%）明顯高于 NRBCAg刺激孔（16.30%）及空白孔（22.86%）（P均＜0.05），而 B細(xì)胞與CD3+CD4+T細(xì)胞P.vAg刺激的凋亡率雖高于NRBCAg刺激孔及空白孔，但差異無顯著性（P均＞0.05）；
　?。?）血漿/PBMC培養(yǎng)上清IFN-γ及TGF-β1水平：AC組血漿IFN-γOD值明顯高于NC組（P＜0.01），且在發(fā)病時(shí)AC組血漿IFN-γO

10、D值明顯高于發(fā)病后1周及發(fā)病后2周（P均＜0.05），但在發(fā)病后1周與發(fā)病后2周AC組血漿IFN-γOD值無顯著性差異（P均＞0.05）；AC組以PvAg刺激的PBMC培養(yǎng)上清IFN-γOD值明顯高于 NC組（P＜0.01），且在發(fā)病時(shí)以 P.vAg刺激的PBMC培養(yǎng)上清IFN-γOD值明顯高于發(fā)病后1周及2周（P均＜0.05）；而AC組與NC組血漿及各刺激孔PBMC培養(yǎng)上清TGF-β1OD值之間差異無顯著性（P均＞0.05）；此外AC

11、組血漿及各刺激孔PBMC培養(yǎng)上清TGF-β1OD值在發(fā)病時(shí)、發(fā)病后1周及發(fā)病后2周皆無顯著性差異（P均＞0.05）；
　?。?）AC組、IC組及NC組血漿IgG抗體水平：AC組血漿抗P.vAg、P.vMSP-1、P.vAMA-1及P.fAg IgG抗體OD值明顯高于 IC組及NC組（P均＜0.05）；此外，IC組血漿抗P.vAg及P.vAMA-1IgG抗體OD值亦明顯高于NC組（P均＜0.05）；AC組與IC組血漿抗NRBCAgI

12、gG抗體OD值均顯著高于NC組（P均＜0.05），但AC與IC兩組之間無顯著性差異（P均＞0.05）。
　　結(jié)論：
　?。?）間日瘧原蟲現(xiàn)癥感染者外周血各細(xì)胞亞群的百分含量發(fā)生了明顯變化，但各細(xì)胞亞群的變化不同；間日瘧原蟲感染時(shí)初始CD4+T及CD8+T細(xì)胞可被激活并分化為記憶性 T細(xì)胞；CD4+CD25+T細(xì)胞百分含量明顯升高，但其中表達(dá)FoxP3細(xì)胞群體的百分含量卻未見明顯升高；
　?。?）P.vAg可增強(qiáng)間日瘧原

13、蟲現(xiàn)癥感染者PBMC的增殖反應(yīng)，而這種增殖反應(yīng)在抗瘧治療后顯著降低；同時(shí)P.vAg可誘導(dǎo)間日瘧原蟲現(xiàn)癥感染者CD3+CD8+T細(xì)胞凋亡；
　?。?）間日瘧原蟲現(xiàn)癥感染者血漿不僅具有高水平抗間日瘧原蟲全蟲抗原的IgG抗體，而且具有高水平抗重組抗原 P.vMSP-1（19）及 P.vAMA-1的IgG抗體，間日瘧原蟲感染所誘導(dǎo)的IgG抗體與 P.fAg有交叉反應(yīng)；此外，間日瘧原蟲感染可誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生抗正常紅細(xì)胞膜抗體；
　　（4）