大劣按蚊PPO基因的克隆與抗約氏瘧原蟲感染免疫防御反應(yīng)的研究.pdf

1、大劣按蚊(Anopheles dirus)是中國和東南亞地區(qū)的重要傳瘧蚊媒,為惡性瘧原蟲的易感蚊種,但可黑化包被中腸內(nèi)發(fā)育的約氏瘧原蟲卵囊并表現(xiàn)出抗性.目前,有關(guān)大劣按蚊種傳播惡性瘧原蟲相關(guān)的研究較多,但對其抵御瘧原蟲感染的先天性免疫防御機(jī)制的研究較少,如黑化包被約氏瘧原蟲卵囊.因此,該課題擬主要進(jìn)行以下幾方面的基礎(chǔ)研究工作:一、大劣按蚊PPO基因的cDNA克隆與序列分析.二、吸血與約氏瘧原蟲感染對大劣按蚊PPO基因轉(zhuǎn)錄的影響.三、約氏

2、瘧原蟲感染斯氏與大劣按蚊前后其中腸內(nèi)PPO的變化.其實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和結(jié)果主要包括以下三個(gè)方面:1.根據(jù)岡比亞按蚊、煙草天蛾和天蠶等9種已知昆蟲PPO的保守氨基酸序列設(shè)計(jì)簡并引物,以大劣按蚊2-3齡幼蟲總RNA為模板進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增后獲得一條約600bp的條帶.2.根據(jù)已克隆AdPPO4基因序列設(shè)計(jì)特異引物,利用半定量RT-PCR分析吸血與約氏瘧原蟲感染對其轉(zhuǎn)錄的影響,并對AdPPO4在蚊各發(fā)育蟲期中的轉(zhuǎn)錄,以及成蚊血淋巴、中腸與唾液腺組織

3、中的轉(zhuǎn)錄進(jìn)行了研究.3.按蚊中腸既是一個(gè)重要的免疫效應(yīng)器官,也是PPO介導(dǎo)瘧原蟲卵囊黑化包被反應(yīng)的場所.綜上所述,利用自行設(shè)計(jì)的PPO基因簡并引物經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增及TA克隆技術(shù)成功克隆了大劣按蚊PPO基因部分序列,并在此基礎(chǔ)上初步研究了吸血與約氏瘧原蟲感染對AdPPO4基因轉(zhuǎn)錄的影響.此外,利用PPO多抗并結(jié)合免疫組化與免疫印跡技術(shù)分析了約氏瘧原蟲感染斯氏與大劣按蚊前后其中腸PPO的變化.上述工作為以后克隆大劣按蚊PPO基因全序列及研