約氏瘧原蟲(chóng)來(lái)源MIF同源分子對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)功能調(diào)節(jié)的探索.pdf

1、瘧疾是世界上最嚴(yán)重的傳染性疾病之一，2010年全球感染瘧疾的人數(shù)仍達(dá)2.16億，死亡人數(shù)約為65萬(wàn)。瘧疾的肆虐不僅威脅疫區(qū)人群的健康和生存質(zhì)量，也給這些地區(qū)的發(fā)展中國(guó)家?guī)?lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失和社會(huì)壓力。在人類(lèi)抗擊瘧疾的戰(zhàn)斗中，對(duì)瘧原蟲(chóng)生物學(xué)特性的了解無(wú)疑是一個(gè)至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。瘧疾與其他大多數(shù)感染性疾病一樣，需要通過(guò)免疫效應(yīng)機(jī)制對(duì)其控制和消除，瘧原蟲(chóng)免疫抑制導(dǎo)致免疫逃逸和過(guò)強(qiáng)的炎癥反應(yīng)引起腦瘧等免疫病理?yè)p傷是這一疾病的突出特征。但目前對(duì)于瘧原

2、蟲(chóng)如何調(diào)節(jié)宿主免疫系統(tǒng)的機(jī)制知之甚少。
　　 哺乳動(dòng)物巨噬細(xì)胞遷移抑制因子（MigrationInhibitoryFactor，MIF）是一種具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，與許多感染性疾病和免疫相關(guān)疾病相關(guān)，且在瘧疾感染病理、特別是瘧疾感染導(dǎo)致的貧血中發(fā)揮了重要作用。目前已有四種瘧原蟲(chóng)來(lái)源MIF(PlasmodiumderivedMIF，pMIF)分子被報(bào)道：P.falciparumMIF(PfMIF)，P.bergheiMIF

3、(PbMIF)，P.vivaxMIF(PvMIF)和P.yoeliiMIF(PyMIF)。pMIF被證明與宿主MIF在高級(jí)結(jié)構(gòu)和功能上有驚人的一致性?，F(xiàn)在已有多個(gè)研究小組在探索pMIF分子的功能，體外實(shí)驗(yàn)證明宿主巨噬細(xì)胞是其靶細(xì)胞，提示這些蟲(chóng)源MIF分子能夠調(diào)節(jié)宿主免疫細(xì)胞。但是pMIF對(duì)機(jī)體詳細(xì)的免疫調(diào)節(jié)機(jī)理還沒(méi)有明確結(jié)論。本論文通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)兩部分探索約氏瘧原蟲(chóng)PyMIF重組蛋白在宿主免疫系統(tǒng)可能的調(diào)節(jié)靶點(diǎn)。
　　

4、作為能夠激活初始T細(xì)胞的抗原遞呈細(xì)胞，在瘧疾抗感染免疫過(guò)程中發(fā)揮了很重要的作用。本實(shí)驗(yàn)室前期做了大量工作探索pMIF對(duì)DC的功能影響，發(fā)現(xiàn)PyMIF可下調(diào)DC表面TLR4分子表達(dá)，且誘導(dǎo)與DC共孵育后CD8+T細(xì)胞的CD69表達(dá)下降。本論文在此基礎(chǔ)上，繼續(xù)探索了PyMIF對(duì)骨髓來(lái)源BM-DC、CD4+T細(xì)胞和全脾細(xì)胞的作用。在體外實(shí)驗(yàn)中，未發(fā)現(xiàn)PyMIF可以影響B(tài)M-DC分泌IL-10;經(jīng)PyMIF作用后的BM-DC與CD4+T細(xì)胞共培

5、養(yǎng)，未見(jiàn)T細(xì)胞表面CD69分子表達(dá)和IL-2分泌有改變：未發(fā)現(xiàn)其可以直接調(diào)節(jié)CD4+T細(xì)胞活化：PyMIF作用后未見(jiàn)CD4+T細(xì)胞CD69表達(dá)和IL-2分泌有改變；未發(fā)現(xiàn)其可以調(diào)節(jié)全脾細(xì)胞向Th1或調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化。因此，我們認(rèn)為在本研究中，PyMIF重組蛋白在體外對(duì)宿主的骨髓來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞分泌IL-10功能、CD4+T細(xì)胞活化和脾細(xì)胞的分化過(guò)程沒(méi)有直接調(diào)節(jié)作用。
　　 我們進(jìn)一步探索了PyMIF在體內(nèi)的功能。為了更好地模擬體內(nèi)

6、的感染環(huán)境，分別用約氏瘧致死株P(guān).yoelii17XL和非致死株P(guān).yoelii17XNL分別感染易感BALB/c小鼠或抗性DBA/2小鼠，建立了四種小鼠感染模型。在感染早期或晚期經(jīng)尾靜脈注射PyMIF重組蛋白，結(jié)果顯示PyMIF能降低四種感染情況下的蟲(chóng)血率，但在不同感染模型中PyMIF對(duì)免疫細(xì)胞活性的調(diào)節(jié)并不相同：約氏瘧致死株感染BALB/c小鼠后，PyMIF能夠下調(diào)髓系DC細(xì)胞和漿樣DC細(xì)胞的比例，并上調(diào)CD4+T細(xì)胞中T-bet+

7、IFN-γ+雙陽(yáng)細(xì)胞的比例；約氏瘧致死株感染DBA/2小鼠后，PyMIF能夠下調(diào)巨噬細(xì)胞比例；而在非致死株感染BALB/c或DBA/2模型中，均未引起所檢測(cè)指標(biāo)的改變。尾靜脈注射PyMIF后，四種感染模型脾細(xì)胞體外培養(yǎng)上清中IFN-γ有上調(diào)趨勢(shì)。除此之外，用PyMIF基因敲除的致死性蟲(chóng)株感染易感型小鼠BALB/c后，發(fā)現(xiàn)在基因敲除蟲(chóng)株感染的小鼠中蟲(chóng)血率比在野生型蟲(chóng)株感染小鼠中高。并且血清中IFN-γ水平低于對(duì)照組。以上工作比較深入地探索