Theromin基因的克隆、表達及融合蛋白活性研究.pdf

1、Theromin基因的克隆、表達及融合蛋白活性研究摘要爭栓栓塞性疾病嚴重威脅著人類的健康，新型凝血酶直接抑制齊。有望克服傳統(tǒng)抗凝藥的應(yīng)用缺陷，已成為當(dāng)今心血管藥物研究領(lǐng)域的一個熱點。Theromi。蛋白抗凝血活性高，具有較高的應(yīng)用前景J深妥碳據(jù)Theromin蛋白的氨基酸序列，設(shè)計了重組的theromin星旦。將重組theromin基因全基因合成后克隆于pEZZ18表達載體上，構(gòu)建成P.。及pspa雙重啟動子控制下的ZZTheromin

2、融合表達質(zhì)粒pEZZT。轉(zhuǎn)化到E.coliJM109后，融合蛋白以可溶形式大部分分泌至周質(zhì)間隙和培養(yǎng)基中。經(jīng)SDSPAGE檢測融合蛋白呈現(xiàn)分子量為43KD和22KD的主帶。融合蛋白經(jīng)過IgGsepharose分離純化后，產(chǎn)量達1.2mgL培養(yǎng)基，抗凝血酶活性為1101UImg融合蛋白。純化的融合蛋白產(chǎn)物經(jīng)過腸激酶切割，SDSPAGE顯示出現(xiàn)14KD的主帶，與天然Theromin蛋白分子量一致。此外，本文還對培養(yǎng)條件的優(yōu)化進行了初步嘗試，

3、為今后進一步研究Theromin蛋白的結(jié)構(gòu)與功能打下了基礎(chǔ)。關(guān)。詞:theromin，克廖融合蛋多分泌表9pEZZ一~一一，，，，，，.........—一文獻綜述血栓是由不同的臨床病理情況、手術(shù)狀態(tài)造成的復(fù)雜的井發(fā)癥。臨床病理上將其分為3種類型:冠狀動脈疾病形成血栓，主要是指急性心肌梗死:腦血管疾病形成血栓，即腦血栓中風(fēng)末梢動靜脈疾病形成血栓，即脈管栓塞。血栓栓塞性疾病已經(jīng)嚴重威脅著人們的生存和健康。據(jù)報道，在美國每年有30000人由

4、于靜脈栓塞而入院.其中12%的病人因此而死亡。肺栓塞每年會造成50000到250000人的死亡。現(xiàn)有預(yù)防和治療技術(shù)的貧乏、極大的臨床治療的需要和近期生物技術(shù)的發(fā)展都觸動人們尋找能夠控制血栓形成過程中的特定靶位的新藥。如今，世界上很多著名的醫(yī)藥公司都在致力于新型抗凝血藥物的研究。AntiplateletagentsAntithromboticagentsFibrinolyticagentsAbcxabAspirinClopidogrelD

5、ipyridamoleEpoprostanolTiclopidineHeparinandheparinlikecompoundsDirectthrombininhibitorsWarfarinStreptokinaseTissueplasminogenactivator(tPA)Table1.EstablishedAntithromboticAgents目前最基本的預(yù)防和治療血栓栓塞性疾病的方法是應(yīng)用溶栓藥、抗凝藥、抗血小板藥的抗血栓療

6、法‘。。這三種藥物都有不同的作用靶位:溶栓藥促進血塊的溶解抗凝藥抑制凝血酶的生成、血纖維蛋白的形成:抗血小板藥物可以抑制血小板的凝聚。傳統(tǒng)的抗凝藥，如非組分肝素、低分子量肝素、丙酮節(jié)輕香豆素(法華令)，雖然具有一定的效果，但是它們也往往帶有嚴重的應(yīng)用限制性?？鼓幬锟赏岣邉屿o脈血栓性栓塞，進行性腦卒、肺栓塞的治療效果，因此尋找有效的抗凝抗栓新藥成為當(dāng)今心血管藥物研究領(lǐng)域的主要研究方向之一?！澳傅闹苯右种苿笔且惠^新的抗凝藥的概念。