融合基因cry2Aa-gna克隆及表達的研究.pdf

1、蘇云金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis，簡稱Bt）是目前應(yīng)用最廣泛一種生物殺蟲劑，它能產(chǎn)生特殊的晶體蛋白，對某些鱗翅目、雙翅目、鞘翅目、膜翅目、螨類和線蟲有毒性。
　　 自上個世紀八十年代以來，通過重組DNA技術(shù)得到了各種蘇云金芽孢桿菌基因轉(zhuǎn)化到不同的作物中，此類轉(zhuǎn)基因作物對靶標害蟲表現(xiàn)出良好的抗性，不僅取得了良好的經(jīng)濟效益，而且取得了十分顯著的社會效益和生態(tài)效益。但是，轉(zhuǎn)基因作物也表現(xiàn)出了一定的局限性，如

2、殺蟲譜窄、毒性較低、害蟲可能產(chǎn)生抗性等缺點。
　　 為解決這些問題，本研究將對刺吸式口器害蟲有毒性的雪花蓮凝集素基因gna與蘇云金芽孢桿菌基因cry2Aα進行了融合，以期望擴大轉(zhuǎn)基因作物的殺蟲譜并且延緩害蟲產(chǎn)生抗性的速度。
　　 通過PCR和TA克隆技術(shù)，克隆了cry2Aα基因和gnα基因，長度分別為1899bp和342bp，并得到pGEM-T-C1質(zhì)粒和pGEM-T-G1質(zhì)粒。再通過雙酶切和連接反應(yīng)，構(gòu)建了pET-C1