蛋白質(zhì)組學研究相關(guān)技術(shù)的發(fā)展及其在大鼠海馬細胞膜蛋白質(zhì)組研究中的應用.pdf

1、　　海馬(hippocampus)是大腦顳葉內(nèi)側(cè)的一個腦結(jié)構(gòu)，是哺乳動物學習和記憶的重要結(jié)構(gòu)區(qū)。但縱觀海馬與記憶的研究領(lǐng)域，無論國內(nèi)國外都沒有研究者涉足海馬細胞膜的蛋白質(zhì)組學研究領(lǐng)域。膜蛋白占人類整個基因組編碼蛋白質(zhì)的近三分之一，在細胞生命活動中發(fā)揮著重要作用?；诘鞍踪|(zhì)整體水平上的海馬質(zhì)膜蛋白質(zhì)組研究將有助于闡明海馬的神經(jīng)生物學功能并有可能發(fā)現(xiàn)一些新的受體與通道蛋白以及藥物靶標。 　　本研究從大鼠海馬細胞膜的富集，膜蛋白的分離鑒定等

2、幾個方面進行了細胞質(zhì)膜的蛋白質(zhì)組學研究，采用了不同的分離鑒定技術(shù)路線，包括傳統(tǒng)的2DE分離結(jié)合LC/Q-TOF方法，以及1D-SDS-PAGE分離結(jié)合LC/Q-TOF，1D-SDS-PAGE分離結(jié)合MALDI-TOF/TOF方法，分別對大鼠海馬組織勻漿提取的質(zhì)膜蛋白以及急性分離培養(yǎng)的海馬細胞提取的質(zhì)膜蛋白質(zhì)進行了鑒定；建立了細胞質(zhì)膜的生物素親和純化方法，該方法用包裹了鏈霉親和素的磁珠純化標記了生物素的質(zhì)膜片段，然后使用磁分離器收集磁珠得

3、到純的質(zhì)膜部分，再采用高鹽高pH溶液洗滌質(zhì)膜，實驗結(jié)果顯示該方法提取的膜蛋白具有高含量的質(zhì)膜特異性蛋白Na+/K+ATPase及Caveolin，且不含有胞質(zhì)特異性蛋白actin，表明該方法能成功地富集膜蛋白，并能除去質(zhì)膜蛋白鑒定中最大的污染蛋白——與質(zhì)膜最緊密相連的胞質(zhì)骨架蛋白的影響。通過對大鼠海馬細胞質(zhì)膜的蛋白質(zhì)組學研究，探索了一條適合于生物膜蛋白的蛋白質(zhì)組學研究方法。在用生物素親和純化質(zhì)膜提取的海馬細胞質(zhì)膜蛋白質(zhì)組中，明確鑒定了1

4、18種蛋白質(zhì)，其中定位在膜上的蛋白質(zhì)有74個，占62.7﹪，表明該方法完全適合于膜蛋白質(zhì)的分析鑒定。根據(jù)Swiss-Prot/TrEMBL數(shù)據(jù)庫中對蛋白質(zhì)功能的描述，對鑒定的蛋白質(zhì)進行了功能分析，表明這些蛋白質(zhì)主要為受體(receptor)蛋白質(zhì)、轉(zhuǎn)運(transport)蛋白質(zhì)、外部酶(exteriorenzyme)、通信(traffic)蛋白質(zhì)、結(jié)構(gòu)(structure)蛋白質(zhì)、粘連(adhesion)蛋白質(zhì)、伴侶(chaperon