虎紋捕鳥(niǎo)蛛毒素組學(xué)和大鼠海馬突觸質(zhì)膜蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、第一部分虎紋捕鳥(niǎo)蛛毒素組學(xué)研究 虎紋捕鳥(niǎo)蛛(Ornithoctonus huwena Wang)分布在中國(guó)南方的云南和廣西一帶，是中國(guó)毒性最強(qiáng)的蜘蛛之一，其毒液中富含各種蛋白質(zhì)與多肽成份。從虎紋捕鳥(niǎo)蛛毒液中已經(jīng)鑒定到包括虎紋毒素-1、虎紋凝集素-1等多種多肽毒素，為進(jìn)一步了解虎紋捕鳥(niǎo)蛛毒素的組成以及其致毒機(jī)理并為將來(lái)從中篩選有開(kāi)發(fā)潛力且具有藥理學(xué)意義的分子，我們采取蛋白質(zhì)組學(xué)的方法對(duì)其粗毒進(jìn)行了全面的分析。 為便于分析，

2、我們采取分子篩層析首先將粗毒分為分子量>10kDa的蛋白質(zhì)組分和分子量<10 kDa的多肽類(lèi)組分。對(duì)于蛋白質(zhì)組分，我們采用一維電泳(SDS-PAGE)和二維雙向凝膠電泳(2DE)進(jìn)行分離，經(jīng)基質(zhì)輔助激光解吸飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(MALDI-TOF-TOF)以及液相電噴霧四級(jí)桿時(shí)間飛行質(zhì)譜(LC-ESI-Q-TOF)鑒定，總共鑒定了90個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)，其中包括：有重要意義的酶、結(jié)合蛋白以及具有重要生物學(xué)功能的蛋白質(zhì)。對(duì)于虎紋捕鳥(niǎo)蛛毒素中的多肽類(lèi)組

3、分，采用陽(yáng)離子交換色譜及反相高效液相色譜進(jìn)行分離，通過(guò)質(zhì)譜MALDI-TOF-TOF進(jìn)行檢測(cè)，總計(jì)發(fā)現(xiàn)有超過(guò)130種不同分子量的成分存在，其中47條多肽采用Edman降解測(cè)序方法進(jìn)行了測(cè)序。 本研究首次全面分析了虎紋捕鳥(niǎo)蛛毒素的組成，揭示了蜘蛛毒素種類(lèi)及功能的復(fù)雜性和多樣性，為深入研究虎紋捕鳥(niǎo)蛛毒素的組成，進(jìn)化，以及毒素分子結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。 第二部分大鼠海馬突觸質(zhì)膜蛋白質(zhì)組學(xué)研究 神經(jīng)系統(tǒng)是生命活動(dòng)中

4、起著整合和調(diào)節(jié)作用的信息系統(tǒng)，海馬是神經(jīng)系統(tǒng)中與生物的各項(xiàng)感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)、學(xué)習(xí)、記憶等功能有著密切關(guān)聯(lián)的組織。神經(jīng)元是神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能單位，具有接受、整合和傳遞信息的功能。神經(jīng)元發(fā)出和接受神經(jīng)沖動(dòng)的基本結(jié)構(gòu)是突觸，它是神經(jīng)元與神經(jīng)元之間相互接觸的部位。當(dāng)受到外界刺激后，神經(jīng)遞質(zhì)從突觸前的神經(jīng)元軸突末端被釋放并與突觸后目標(biāo)神經(jīng)元上的受體相結(jié)合。突觸的質(zhì)膜上分布有許多與信號(hào)傳導(dǎo)等功能相關(guān)的蛋白質(zhì)。本文為鑒定大鼠海馬突觸質(zhì)膜蛋白質(zhì)，利用不連續(xù)

5、蔗糖密度梯度分離純化得到樣品，采用兩向 Blue Native-PAGE/SDS-PAGE電泳分離突觸質(zhì)膜蛋白質(zhì)，結(jié)合HCT質(zhì)譜對(duì)其進(jìn)行鑒定分析。我們一共鑒定到281個(gè)非冗余蛋白質(zhì)，具有1個(gè)或多個(gè)跨膜區(qū)的蛋白質(zhì)約占36％，與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能相關(guān)的蛋白質(zhì)占13.3％。 本研究是第一次運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)大鼠海馬突觸質(zhì)膜蛋白質(zhì)進(jìn)行分析，其結(jié)果表明Blue Native-PAGE/SDS-PAGE是一種有效地分離膜蛋白質(zhì)的手段，并且為進(jìn)一