多方法檢測碳青霉烯酶對比研究.pdf

1、目的：分析培養(yǎng)時間、培養(yǎng)基對受試菌株Carba NP試驗（CNP）的影響；研發(fā)快速Carba NP試驗（RCNP），對其檢測碳青霉烯酶的效果進(jìn)行評價，并同改良Hodge試驗（MHT）、Carba NP試驗、改良碳青霉烯失活法（mCIM）對比分析；研發(fā)“0.5+9h孵育模式”，對其在mCIM中的臨床應(yīng)用價值進(jìn)行評估；研發(fā)抑制劑增強改良碳青霉烯失活法（imCIM），對其在B類碳青霉烯酶檢測中的價值進(jìn)行探討，并同EDTA紙片增效試驗（EDPT

2、）對比分析。以期在流行病學(xué)調(diào)查、院內(nèi)感染控制、耐藥基因分型方面為臨床實驗室提供多指標(biāo)分析研究。
　　方法：
　　1.臨床分離的264株病原菌作為研究對象，其中肺炎克雷伯菌69株、大腸埃希菌60株、鮑曼不動桿菌68株、銅綠假單胞菌67株，使用血瓊脂平板培養(yǎng)6h、12h、24h及保存7d的菌株行Carba NP試驗。
　　2.受試菌株轉(zhuǎn)種于中國藍(lán)瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、MH平板、營養(yǎng)瓊脂平板、含鋅離子的營養(yǎng)瓊脂平板分別進(jìn)

3、行培養(yǎng)，行Carba NP試驗檢測碳青霉烯酶。
　　3.自制碳青霉烯酶檢測液，建立快速Carba NP試驗，采用研磨法代替孵育受試菌株，以聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，并同改良Hodge試驗、Carba NP試驗及改良碳青霉烯失活法比較。
　　4.采用“0.5+9h孵育模式”行mCIM檢測碳青霉烯酶，采用imCIM和EDPT篩查B類碳青霉烯酶，應(yīng)用一致性檢驗、McNemarχ2檢驗、Wilcoxon符號秩和檢驗及RO

4、C曲線進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析。
　　結(jié)果：
　　1.培養(yǎng)24h菌株行 Carba NP試驗敏感度和特異度分別為95.1％（121/144）和96.7%（116/120）。6h和12h培養(yǎng)的菌株行Carba NP試驗敏感度分別為84.0%（121/144）和91.7%（132/144），相比24h培養(yǎng)的菌株敏感度有所下降，但其特異度仍為96.7%（116/120），與24h培養(yǎng)菌株無差別。所有菌株儲存7天后Carba NP試驗結(jié)果

5、均無變化，與24h培養(yǎng)菌株的敏感度和特異度一致。6h、12h、24h培養(yǎng)的菌株Kappa值分別為0.796、0.878、0.916。
　　2.血瓊脂平板上分離菌株行Carba NP試驗敏感度和特異度分別為95.1%（137/144）、95.8%（115/120），Kappa值0.908；選擇培養(yǎng)基（中國藍(lán)瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板）的敏感度分別為87.5%（126/144）、83.3%（120/144），Kappa值分別為0.810

6、、0.758；MH平板的敏感度和特異度分別為88.2%（127/144）、95.0%（114/120），Kappa值0.826；營養(yǎng)瓊脂平板的敏感度僅為79.9%（115/144），Kappa值0.714；含鋅離子的營養(yǎng)瓊脂平板敏感度有所提高，為93.8%（135/144），Kappa值0.855。
　　3.改良Hodge試驗敏感度和特異度分別為75.0%（108/144）、87.5%（105/120），Kappa值0.616；C

7、arba NP試驗敏感度和特異度分別為91.7%（132/144）、97.5%（117/120），Kappa值0.886；改良碳青霉烯失活法敏感度和特異度分別為94.5%（136/144）、97.5%（117/120），Kappa值0.916；快速Carba NP試驗敏感度和特異度分別為89.6%（129/144）、99.2%（119/120），Kappa值0.879。采用McNemarχ2檢驗對CNP、CIM及RCNP進(jìn)行比較，其χ2

8、值分別為244.58、218.51，P值均<0.01。
　　4.采用“0.5+9h孵育模式”行mCIM對A、B類碳青霉烯酶有較高的檢出率， imCIM敏感度和特異度分別為85.71%（66/77）和97.86%（183/187），Kappa值0.859；EDPT敏感度和特異度分別為66.23%（51/77）和88.77%（166/187），Kappa值0.561。imCIM抑菌圈差值（ΔdimCIM）與EDPT抑菌圈差值（ΔdED

9、PT）有差別，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。imCIM與EDPT的ROC曲線下面積分別為0.988（95%CI：0.977~0.999）、0.936（95%CI：0.909~0.963）。
　　結(jié)論：
　　1.Carba NP試驗對于產(chǎn)A類碳青霉烯酶的菌株，培養(yǎng)6h、12h及保存7d的菌株同培養(yǎng)24h無差別，在1個工作日內(nèi)即可明確菌株是否產(chǎn)酶，但對產(chǎn)B、D類碳青霉烯酶菌株的檢出率有一定影響。
　　2.采用血瓊脂平板

10、上生長的菌株行Carba NP試驗?zāi)軌驕?zhǔn)確、快速的檢測出產(chǎn)碳青霉烯酶菌株，采用麥康凱瓊脂平板、中國藍(lán)瓊脂平板、MH平板、營養(yǎng)瓊脂平板上生長的菌株行Carba NP試驗檢測碳青霉烯酶易導(dǎo)致假陰性。
　　3.快速Carba NP試驗通過用研磨法代替孵育受試菌株，15min內(nèi)即可發(fā)現(xiàn)產(chǎn)酶菌株，較Carba NP試驗更為快速，提高了院內(nèi)感染監(jiān)測的時效性，有利于大批量的流行病學(xué)調(diào)查。
　　4.Carba NP試驗相比改良Hodge試驗

11、操作簡單、分析速度快、適用范圍廣、敏感度和特異度高，有利于及時準(zhǔn)確地發(fā)現(xiàn)產(chǎn)碳青霉烯酶菌株，并對B類碳青霉烯酶有較高的檢出率。
　　5.改良碳青霉烯失活法是一種廉價、高效、穩(wěn)定的碳青霉烯酶檢測方法，有助于提高產(chǎn)碳青霉烯酶菌株的檢出率，在醫(yī)院感染監(jiān)控中有重要價值。
　　6.改良碳青霉烯失活法“0.5+9h孵育模式”的建立可為早期院感控制提供依據(jù)，imCIM較EDPT用于檢測B類碳青霉烯酶敏感度、特異度較高，結(jié)果易于觀察判斷，且其