革蘭陰性菌中碳青霉烯酶基因分布及傳播特性研究.pdf

1、目的：
　　研究臨床分離的革蘭陰性菌中不同種屬細(xì)菌對碳青霉烯類藥物的耐藥情況;了解革蘭陰性菌中不同種屬細(xì)菌中碳青霉烯酶耐藥基因分布;同時探討碳青霉烯酶耐藥基因在不同菌屬中的播散特性，為臨床用藥及控制醫(yī)院感染提供依據(jù)。
　　方法：
　　1、回顧性分析2008～2012年間溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床分離革蘭陰性桿菌對碳青霉烯類藥物的耐藥情況，了解5年間不同菌屬對碳青霉烯類藥物的耐藥趨勢。
　　2、碳青霉烯類藥物對碳

2、青霉烯耐藥革蘭陰性菌的MIC值檢測:采用瓊脂稀釋法檢測碳青霉烯類藥物亞胺培南、美羅培南和厄他培南對碳青霉烯耐藥革蘭陰性菌的最低抑菌濃度值(MICs)，結(jié)果根據(jù)2013年CLSI的標(biāo)準(zhǔn)判讀。
　　3、碳青霉烯酶表型檢測:采用改良的Hodge實驗對碳青霉烯類耐藥的腸桿菌科細(xì)菌進(jìn)行碳青霉烯酶的表型檢測。
　　4、碳青霉烯酶基因檢測: PCR檢測碳青霉烯耐藥的腸桿菌科細(xì)菌和銅綠假單胞菌中的A類碳青霉烯酶基因、B類金屬酶基因和D類bl

3、aOXA-48基因，PCR檢測碳青霉烯耐藥鮑曼不動桿菌中的blaOXA-23，-24,-51,-58、 blaIMP、 blaVIM，、blaGIM、blaSIM-1、 blaSPM、 blaNDM-1基因，對PCR陽性產(chǎn)物進(jìn)行測序確認(rèn)，分析革蘭陰性菌中不同菌屬中主要流行的碳青霉烯酶基因。
　　5、碳青霉烯酶基因水平轉(zhuǎn)移研究:采用接合轉(zhuǎn)移試驗分析碳青霉烯酶基因陽性細(xì)菌中的碳青霉烯耐藥基因的水平轉(zhuǎn)移特性。
　　6、耐碳青霉烯革

4、蘭陰性菌的流行性研究:脈沖場凝膠電泳分析耐藥菌株之間的同源性，研究攜帶碳青霉烯酶基因的各菌屬細(xì)菌在院內(nèi)的流行特性;同時用多位點測序分型方法(MLST)檢測碳青霉烯酶基因陽性的肺炎克雷伯菌的ST型，明確流行的主要ST型，并與國際流行型進(jìn)行比較。
　　結(jié)果：
　　1、2008～2012年從臨床標(biāo)本中分離的3139株革蘭陰性菌中，對碳青霉烯酶耐藥的菌株共754株(24.0％)，鮑曼不動桿菌對碳青霉烯的耐藥率最高，達(dá)82.3％，其次

5、是銅綠假單胞菌(36.6％)，不同菌屬腸桿菌科細(xì)菌對碳青霉烯的耐藥性表現(xiàn)不一，本研究腸桿菌科菌中耐藥率最高的是沙雷菌屬(22.1％)，其次是枸櫞酸菌屬(9.0％)，腸桿菌屬(7.7％)，克雷伯菌屬(2.2％)和埃希菌屬(0.4％)，未在變形家族細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)對碳青霉烯耐藥的菌株。不同菌屬中對碳青霉烯耐藥細(xì)菌的標(biāo)本來源都以痰液最多，菌株各臨床科室分布不一，整體無明顯的病區(qū)集中趨勢，主要分布于重癥監(jiān)護(hù)病房(ICU)、神經(jīng)外科和燒傷科。
　

6、　2、5年間本院鮑曼不動桿菌對碳青霉烯的耐藥率呈逐年上升的趨勢，且每年的耐藥率都高于全國CHINET的監(jiān)測結(jié)果;5年間銅綠假單胞菌對碳青霉烯類藥物的耐藥率沒有明顯的上升趨勢，但耐藥率波動較大，且均高于全國CHINET耐藥性監(jiān)測結(jié)果，本院腸桿菌科細(xì)菌對碳青霉烯的耐藥率低于全國CHINET的監(jiān)測結(jié)果，且5年間對碳青霉烯的耐藥率波動不大，呈平穩(wěn)狀態(tài)。
　　3、藥敏檢測結(jié)果顯示不同菌屬細(xì)菌對不同種類的碳青霉烯類抗生素的耐藥性呈現(xiàn)不均一性，

7、腸桿菌科細(xì)菌對厄他培南的耐藥率最高(98.6％)，其次是亞胺培南(62.0％)，對美羅培南的耐藥率最低(47.3％)，大腸埃希菌和腸桿菌屬細(xì)菌主要對厄他培南耐藥，肺炎克雷伯菌和沙雷菌屬對三種藥物全部耐藥，而鮑曼不動桿菌和銅綠假單胞菌幾乎同時對亞胺培南和美羅培南耐藥。
　　4、74株碳青霉烯類耐藥的腸桿菌科細(xì)菌中改良Hodge試驗陽性49株（陽性率為62.1％），PCR法檢測得到碳青霉烯酶基因陽性菌株53株，其中43株攜帶blaKP

8、C-2，10株菌攜帶blaIMP，其中1株菌攜帶blaMP-4，9株菌攜帶blaIMP-8;102株耐碳青霉烯的鮑曼不動桿菌均攜帶blaOXA-51基因，其中82株菌攜帶blaOXA-23，另外有8株菌攜帶blaIMP。170株碳青霉烯酶耐藥的銅綠假單胞菌中有15株菌(8.8％)攜帶兩種類型的碳青霉烯酶基因:其中8株菌攜帶blaIMP-1，7株菌攜帶blaVIM的菌株中，5株攜帶blaVIM-2，2株攜帶blaVIM-4。
　　5

9、、接合轉(zhuǎn)移試驗發(fā)現(xiàn)53株碳青霉烯酶基因陽性的腸桿菌科細(xì)菌中有16株菌的碳青霉烯酶基因（包括blaKPC和blaIMP）被成功轉(zhuǎn)移到受體菌中，16株接合菌株相應(yīng)的供體菌類型廣泛，包括大腸埃希菌，肺炎克雷伯菌，枸櫞酸菌，沙雷菌和腸桿菌，接合菌株與受體菌相比其對碳青霉烯類藥物的MIC值均有不同程度的提高，提示碳青霉烯酶基因可以通過接合轉(zhuǎn)移的方式在不同種屬細(xì)菌間傳播。而銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌中的碳青霉烯酶基因未成功轉(zhuǎn)移到受體菌。
　　

10、6、脈沖場凝膠電泳分析發(fā)現(xiàn)本院對碳青霉烯耐藥的鮑曼不動桿菌和粘質(zhì)沙雷菌存在廣泛的克隆傳播現(xiàn)象，腸桿菌屬細(xì)菌中也發(fā)現(xiàn)3株具有同源性的細(xì)菌，同時發(fā)現(xiàn)4株分離自不同年份和不同科室的攜帶KPC的肺炎克雷伯菌具有相同的克隆型，對產(chǎn)KPC的肺炎克雷伯菌進(jìn)行MLST分型發(fā)現(xiàn)共分為6種ST型，其中4株有相同克隆型的菌株為國內(nèi)廣泛流行的ST11型，其余株分別為ST880，ST65，ST23，ST730，ST622。銅綠假單胞菌表現(xiàn)為高度異源性，提示醫(yī)院內(nèi)

11、感染的銅綠假單胞菌并非以患者之間的傳播為主，多為患者獨立感染環(huán)境中的病原體。
　　結(jié)論：
　　1、本研究革蘭陰性菌中鮑曼不動桿菌和銅綠假單胞菌對碳青霉烯類抗生素的耐藥率較高，高于國內(nèi)外的報道，腸桿菌科細(xì)菌對碳青霉烯的耐藥率低于國內(nèi)報道。
　　2、不同菌屬細(xì)菌對不同種類的碳青霉烯類抗生素的耐藥性存在差異，腸桿菌科細(xì)菌對厄他培南的耐藥率最高，而鮑曼不動桿菌和銅綠假單胞菌幾乎同時對碳青霉烯類藥物全部耐藥。
　　3、本院

12、碳青霉烯耐藥的腸桿菌科細(xì)菌中分布的碳青霉烯酶基因是blaKPC和blaIMP，且基因的菌株分布廣泛，鮑曼不動桿菌中的碳青霉烯酶基因主要是blaOXA-23，與鮑曼不動桿菌不同，碳青霉烯酶在銅綠假單胞菌中的分布率較低，其不是銅綠假單胞菌對碳青霉烯耐藥的主要原因。
　　4、blaKPC和blaIMP可通過接合轉(zhuǎn)移的方式在腸桿菌科不同菌屬間傳播，提示這些基因存在跨種屬間傳播的危險性。
　　5、本院耐碳青霉烯的鮑曼不動桿菌、粘質(zhì)沙雷