鹽單胞菌分離、鑒定及其二氨基庚二酸脫羧酶基因克隆與表達(dá).pdf

1、廈門大學(xué)碩士學(xué)位論文鹽單胞菌分離、鑒定及其二氨基庚二酸脫羧酶基因克隆與表達(dá)姓名：周韜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：水生生物學(xué)指導(dǎo)教師：劉廣發(fā)20070601摘要A b s t r a c tD A P D C i s av i t a m i n B 6 - d e p e n d e n te n z y m e t h a t s t e r e o s p e c i f i c a l l y c o n v e r t sm e s

2、 o —D A P t o L —l y s i n e ．T h e e n z y m ei s o f i n t e r e s tb e c a u s e o fi t s i m p o r t a n c e i nb a c t e r i a lg r o w t ha n ds u r v i v a l ．L y s i n ei s e s s e n t i a l l yr e q u i r e di n

3、p r o t e i nb i o s y n t h e s i sa n df o rt h e f tv i a b i l i t ya n dd e v e l o p m e n t ．S ob i o s y n t h e s i so f L —l y s i n eh a sc o m e u n d e ri n c r e a s e d s c r u t i n ya sa t a r g e tf o r

4、 n o v e l a n t i b a c t e r i a la g e n t s ．A s t r a i no fh a l o p h i l i cb a c t e r i u mw a s i s o l a t e d f r o ma h i g h N a C lc o n c e n t r a t i o nm e d i u m c u l t u r e dw i t hD ．s a l i n a

5、 ．B a s e do nt h ea n a l y s i so fb a c t e r i a l 16 Sr D N A ，c e l lm o r p h o l o g y ，p h y s i o l o g i c a la n d b i o c h e m i c a lc h a r a c t e r i s t i c s ，t h es t r a i nW a s d e s i g n a t e d

6、a sH a l o m o n a ss p ．Z L - 4 ．T h e nt o t a l D N A o ft h es t r a i nw a se x t r a c t e da n dp a r t i a l l yd i g e s t e db yS a u3 A I ．t h eD N A f r a g m e n t sr a n g e df r o m1 ～6k bw e r er e t r i

7、e v e da n dl i n k e d w i t hp U C 1 9 t of o r mr e c o n s t r u c t e dp l a s m i d s ．T h e nt h e yw e r et r a n s f o r m e d i n t oE ．c o l iD H 5 a t o c o n s t r u c tap a r t i a lg e n el i b r a r yo fH

8、 a l o m o n a s s p ．Z L 一4 ．F i f t y c l o n e sg r o w i n g o nt h e s c r e e n i n gm e d i u m w e r er a n d o m l ys e l e c t e d ，a n d t h e n t h e D N Af r a g m e n t sw i t h i n t h e r e c o n s t r u

9、c t e dp l a s m i d s w e r es e q u e n c e d a n d t a k e n a h o m o l o g o u sB L A S T b yd i n to f A m e r i c aG e n B a n k t o s e e kt h eg e n ew e n e e du n t i lag e n eQ y s 的t h a t c o d i n gf o r d

10、 i a m i n o p i m e l a t ed e c a r b o x y l a s e ( D A P D C ) h a s b e e nf o u n d ．A f t e rt h a t ，t h et y sA g e n e W a s a m p l i f i e d b yP C R a n d l i g a t e d w i t hv e c t o rp E T 3 2 a t or e

11、c o n s t r u c tan e wp l a s m i dp E T —l y s A ．T h e l a t t e r W a s t h e nt r a n s f o r m e d ’i n t o E ．c o l i B L 2 1 ．N e wt r a n s f o r m a n t ( w i t hp E T - l y s A ) W a s c u l t u r e d a n d s

12、h a k e n a t 3 7 “ C i n L Bm e d i u ms u p p l e m e n t e dw i t h lm m o l ／Li s o p r o p y l - 伊d —t h i o g a l a c t o p y r a n o s i d e ( I P T G ) O V e r8h ，t h e nt o t a l —a n de x t r a c e l l u l a r

13、- a m o u n to fL —l y s i n eo ft h es a m p l e sw e r ed e t e c t e d ．T h er e s u l t s s h o w e dt h a tt h ey i e l do fL - l y s i n eo ft r a n s f o r m a n tW a sm a r k e d l ym o r et h a nc o n t r o l ，i

14、 t sL —l y s i n e i n t h ec e l l w a s e x c r e t e do u t s i d es l o w l y ．F u r t h e r m o r e ，D A P D Ca c t i v i t yh a sb e e n t e s t e db e t w e e nt r a n s f o r m a n ta n dc o n t r o lb ym e a n s

15、o f t h e i rc r u d ee x t r a c t s ．E v i d e n c ep r o v e d t h a tt h ea c t i v i t yo f t h ef o r m e r w a s 1 ．7 8t i m e st h a n c o n t r 0 1 ．I ns u m ，a l lt h e d a t am e n t i o n e da b o v e i m p l

16、 i e dt h a tt h ec l o n e df o r e i g nt y sA g e n eh a sb e e n t r a n s f o r m e di n t oE ．c o l i B L 2 1 a n d e x p r e s s e d h i g hl e v e lc a t a l y z i n g a c t i v i t y ．K e y w o r d s ：H a l o m