鳥氨酸脫羧酶基因表達與卵巢癌關(guān)系的研究.pdf

1、[目的] 卵巢癌是女性生殖道腫瘤中病死率最高的疾病，采用目前的治療方法，即使經(jīng)過徹底的手術(shù)治療和輔助化療，晚期患者5年生存率僅為15％。研究卵巢癌相關(guān)的預測指標將有重要意義。鳥氨酸脫羧酶(ornithinedecarboxylase，ODC)是多胺生物合成的限速酶，通過調(diào)節(jié)多胺含量影響細胞增殖分化，其活性增高與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)和免疫組化方法對卵巢良惡性腫瘤組織中的ODCmR

2、NA以及相應蛋白表達進行檢測，結(jié)合其臨床病理學指標進行分析，旨在從轉(zhuǎn)錄和翻譯水平初步探討ODC基因在卵巢腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用及其在卵巢癌診斷中的價值，并為臨床卵巢癌基因治療提供理論依據(jù)。 [材料與方法] 1.RT-PCR隨機選擇卵巢癌32例，卵巢良性腫瘤26例，正常卵巢17例。按照Trizol試劑盒的說明提取組織中的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄(RT)合成cDNA用作PCR的模板DNA，以β-actin基因作為內(nèi)參照，使用特異性引

3、物進行PCR。PCR產(chǎn)物行瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察電泳帶，凝膠成像分析系統(tǒng)掃描拍照。 2.免疫組化檢測卵巢良惡性腫瘤細胞中ODC蛋白的含量由山東大學齊魯醫(yī)院病理科提供病理切片，卵巢癌31例，卵巢良性腫瘤20例，正常卵巢6例。采用SABC法，免疫組織化學染色結(jié)果判定在高倍鏡下進行。陽性細胞比率≤10％記為(-)，10％～30％記為(+)，30％～60％記為(++)，＞60％記為(+++)。 [結(jié)果] ①所有卵巢

4、標本中ODCmRNA的表達豐度均以均數(shù)士標準差表示。卵巢癌ODCmRNA表達量較正常卵巢顯著升高，差異極顯著(P＜0.001)，ODC基因表達在卵巢良惡性腫瘤之間及良性腫瘤、正常卵巢之間均存在顯著性差異(P=0.045，P=0.044，P＜0.05)；卵巢癌Ⅲ+Ⅳ期ODCmRNA表達量較Ⅰ+Ⅱ期升高，統(tǒng)計學有極顯著差異(P=0.0095)。②免疫組化顯示ODC主要存在于細胞漿中，絕大多數(shù)(30/31)卵巢癌組織細胞內(nèi)可見棕黃色深染顆粒。

5、卵巢良惡性腫瘤及正常卵巢組織之間ODC蛋白表達差異顯著(X2=20.202，P＜0.0001)，良性卵巢腫瘤組陽性表達高于正常卵巢組，而卵巢癌組又高于良性腫瘤組(P＜0.05)：在卵巢癌組中，隨著組織學分級和臨床分期的增高，ODC蛋白的陽性表達遞增，有顯著性差異(P＜0.05)，不同病理類型的惡性腫瘤細胞內(nèi)染色未見明顯差異。③經(jīng)直線相關(guān)分析及Spearman等級相關(guān)分析檢驗證明，卵巢癌組織中ODCmRNA表達水平和ODC蛋白免疫組化的陽

6、性表達率呈相關(guān)關(guān)系(r=0.9062，P＜0.05)，且隨著腫瘤惡性程度的增高和臨床期別的增加，ODCmRNA表達水平和ODC蛋白的陽性表達率明顯增加(rs=0.9562，0.01＜P＜0.02)，具有統(tǒng)計學差異。因此，在某種意義上可以認為，ODC蛋白的表達情況間接反映出mRNA表達水平。 [結(jié)論] 本文證明卵巢腫瘤組織中ODC基因表達增高，而惡性腫瘤組織中異常高表達，并隨著臨床分期及組織學分級的增高遞增，表明ODC基因