中國(guó)明對(duì)蝦抗脂多糖因子(ALFFc)基因的重組表達(dá).pdf

1、上世紀(jì)80年代開(kāi)始，對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)得到了迅速發(fā)展，這給沿海地區(qū)帶來(lái)了可觀的經(jīng)濟(jì)效益，但同時(shí)對(duì)蝦疾病也給養(yǎng)殖帶來(lái)了很大的困擾，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。近年來(lái)對(duì)蝦的免疫學(xué)研究得到了長(zhǎng)足進(jìn)展，不斷有免疫相關(guān)基因被克隆并得以深入研究?？怪嗵且蜃樱ˋnti-lipopolysaccharide factor，ALF）是發(fā)現(xiàn)于鱟和甲殼動(dòng)物體內(nèi)的一種重要的抗菌蛋白，具有廣譜抗菌活性，對(duì)其進(jìn)行深入研究將有利于對(duì)蝦疾病的控制。本文以中國(guó)明對(duì)蝦為材料，圍繞其A

2、LF（ALFFc）基因的重組表達(dá)展開(kāi)研究，主要包括以下3個(gè)方面：
　　 1.根據(jù)中國(guó)明對(duì)蝦ALFFc基因設(shè)計(jì)引物，構(gòu)建了pET-DsbA-ALFFc原核表達(dá)載體，對(duì)其進(jìn)行了原核表達(dá)。由于常規(guī)方法誘導(dǎo)ALFFc基因表達(dá)會(huì)出現(xiàn)宿主“自殺”現(xiàn)象，難以獲得重組蛋白，所以本研究嘗試了“低溫誘導(dǎo)法”，“DTT誘導(dǎo)法”，和“IPTG篩選法”
　　 三種策略，均實(shí)現(xiàn)了重組蛋白的高表達(dá)。
　　 2.對(duì)上述三種誘導(dǎo)方法進(jìn)行比較，最終

3、選擇IPTG篩選法對(duì)DsbA-ALFFc重組蛋白進(jìn)行大規(guī)模誘導(dǎo)表達(dá)，用His親和層析柱純化重組蛋白后免疫新西蘭大白兔，制備了抗血清。經(jīng)Western Blot檢測(cè)在預(yù)期位置上得到了一條特異性條帶。
　　 3.構(gòu)建了pPIC9K-ALFFc真核表達(dá)載體，用GS115宿主菌對(duì)ALFFc基因進(jìn)行真核表達(dá)，并對(duì)發(fā)酵條件進(jìn)行了摸索。用上述制備的抗血清做Western Blot檢測(cè)，結(jié)果顯示：在ALFFc預(yù)期位置出現(xiàn)了一條特異性條帶，這說(shuō)明