中國(guó)明對(duì)蝦抗脂多糖因子基因克隆及其在大腸桿菌中的重組表達(dá).pdf

1、本文對(duì)中國(guó)明對(duì)蝦抗脂多糖因子基因克隆及其在大腸桿菌中的重組表達(dá)進(jìn)行了研究。主要成果如下： 1．中國(guó)明對(duì)蝦ALF基因克隆根據(jù)在其它相近物種所得ALF基因的保守區(qū)進(jìn)行比對(duì)，設(shè)計(jì)了中國(guó)明對(duì)蝦克隆ALF基因中間片段的兼并引物，通過多次試驗(yàn)成功探索到克隆ALF基因的最佳條件，并克隆到280 bp的片段，據(jù)測(cè)序結(jié)果分別設(shè)計(jì)了克隆ALF3’和5’端的引物，利用它們分別和3’錨定引物、5’PCR Primer組成一對(duì)引物，克隆到了ALF的3’和

2、5’端，通過測(cè)序并拼接獲得了中國(guó)明對(duì)蝦ALF全長(zhǎng)基因。 2．重組表達(dá)載體的構(gòu)建將已克隆到的中國(guó)明對(duì)蝦ALF基因分別以pET-30a(+)和pGEX-4T-1為載體構(gòu)建重組載體。 3．ALF基因在大腸桿菌的表達(dá)將構(gòu)建好的重組載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)的大腸桿菌BL21，對(duì)中國(guó)明對(duì)蝦的ALF基因在原核中的表達(dá)進(jìn)行了研究，并對(duì)其表達(dá)的蛋白進(jìn)行純化。在表達(dá)過程中成功解決了基因中含有大腸桿菌稀有密碼子引起的表這量低的難題。為研究者在解決表達(dá)量