α7nAchR激動(dòng)劑對體外循環(huán)大鼠腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:
　　通過觀察大鼠腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞（Enteric gliacells，EGCs）在體外循環(huán)致腸屏障損傷中的變化特點(diǎn)，進(jìn)而探討α7nAchR激動(dòng)劑對體外循環(huán)大鼠EGCs的影響與可能機(jī)制。
　　方法:
　　選擇成年清潔SD大鼠96只，400～500g，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為4組，分別為假手術(shù)組（S組）、體外循環(huán)(CPB)組（C組）、PHA568487+體外循環(huán)(CPB)組（P組）、MLA(Methyllycaconi

2、tine)+PHA568487+體外循環(huán)(CPB)組（M組），每組按各采血時(shí)相點(diǎn)分為4個(gè)亞組，每一亞組6只大鼠。實(shí)驗(yàn)大鼠術(shù)前禁食6h，不禁水，腹腔注射10％水合氯醛麻醉（300mg/kg）。S組麻醉后經(jīng)左股動(dòng)脈、尾動(dòng)脈、右股靜脈及右頸內(nèi)靜脈穿刺置管;C組麻醉置管后建立體外循環(huán)(CPB)模型，維持時(shí)間為1小時(shí);P組麻醉置管并給予PHA568487(0.8mg/kg)腹腔注射30min后建立體外循環(huán)(CPB)模型;M組麻醉置管并給予PHA5

3、68487(0.8mg/kg)腹腔注射，30min后再給予MLA（6mg/kg）腹腔注射，并建立體外循環(huán)(CPB)模型。隨后各實(shí)驗(yàn)組分別在CPB開始時(shí)(T0)、CPB60min(T1)、停CPB后2h(T2)、停CPB后6h(T3)時(shí)間點(diǎn)于右頸內(nèi)靜脈采集血液標(biāo)本，記錄血流動(dòng)力學(xué)變化及血?dú)夥治鼋Y(jié)果，ELISA法檢測血清白細(xì)胞介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、D一乳酸、腸脂肪酸結(jié)合蛋白（I-FABP）的變化;分別于各時(shí)間點(diǎn)脊

4、椎脫臼法處死實(shí)驗(yàn)大鼠后取空、回腸組織制作病理切片，HE染色觀察各組形態(tài)學(xué)變化;Western-blot法檢測腸粘膜緊密連接蛋白ZO-1、Occludin及腸膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)、鈣結(jié)合蛋白(S-100)的表達(dá)變化;免疫組化法觀察CPB后EGCs的變化。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析與處理可利用SPSS19.0軟件，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(-)x±s）表示，單因素方差分析用于組間比較，重復(fù)測量設(shè)計(jì)的方差分析用于組內(nèi)比較，當(dāng)p＜0.05時(shí)證明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、意義。
　　結(jié)果:
　　1.大鼠腸組織形態(tài)學(xué)變化結(jié)果
　　各組大鼠腸粘膜組織切片均選取T2時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行比較。
　　光鏡下HE染色顯示，S組腸粘膜未見明顯改變;C組腸粘膜出現(xiàn)不同程度的損傷，絨毛縮短，腸粘膜出血、水腫，炎性細(xì)胞浸潤，腸上皮細(xì)胞變性、壞死;P組和M組腸粘膜損傷均減輕，P組損傷最輕，僅有輕度腸粘膜腺體擴(kuò)張，腸上皮細(xì)胞輕度變性，少量炎性細(xì)胞釋放。
　　2.血清IL-6和TNF-α水平的變化
　　

6、與S組比較，C組、P組和M組大鼠血清IL-6和TNF-α水平在T1～T3時(shí)間點(diǎn)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與C組比較，P組和M組大鼠血清IL-6和TNF-α水平在T1～T3時(shí)間點(diǎn)均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與P組比較，M組大鼠血清IL-6和TNF-α水平在T1—T3時(shí)間點(diǎn)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　3.血清D一乳酸和I-FABP水平的變化
　　與S組比較，C組、P組和M組大鼠血

7、清D-乳酸和I-FABP水平在T1～T3時(shí)間點(diǎn)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與C組比較，P組和M組大鼠血清D一乳酸和I-FABP水平在T1～T3時(shí)間點(diǎn)均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與P組比較，M組大鼠血清D一乳酸和I-FABP水平在T1～T3時(shí)間點(diǎn)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　4.腸上皮緊密連接蛋白ZO-1和occludin表達(dá)的變化
　　與S組比較，C組、P組和M組大鼠腸上皮ZO-

8、1和occludin表達(dá)在T1～T3時(shí)間點(diǎn)均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與C組比較，P組和M組大鼠腸上皮ZO-1和occludin表達(dá)在T1—T3時(shí)間點(diǎn)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與P組比較，M組大鼠腸上皮ZO-1和occludin表達(dá)在T1～T3時(shí)間點(diǎn)均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　5.腸膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAP表達(dá)的變化
　　與S組比較，C組、P組和M組大鼠腸上皮GFAP表達(dá)在T

9、1～T3時(shí)間點(diǎn)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與C組比較，P組和M組大鼠腸上皮GFAP表達(dá)在T1～T3時(shí)間點(diǎn)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與P組比較，M組大鼠腸上皮GFAP表達(dá)在T1～T3時(shí)間點(diǎn)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　6.鈣結(jié)合蛋白S-100表達(dá)的變化
　　與S組比較，C組、P組和M組腸組織S-100蛋白表達(dá)在T1～T3時(shí)間點(diǎn)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與C組比較，P

10、組和M組腸組織S-100蛋白表達(dá)在T1～T3時(shí)間點(diǎn)均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);一與P組比較，M組腸組織S-100表達(dá)在T1～T3時(shí)間點(diǎn)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　7.免疫組化法檢測腸膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAP表達(dá)的變化
　　各組大鼠GFAP陽性表達(dá)結(jié)果均選取T2時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行比較。
　　免疫組化結(jié)果顯示，GFAP存在于大鼠回腸組織的腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中，被染成棕褐色的顆粒為GFAP陽性表達(dá)的細(xì)胞。