乳糖酸修飾的樹狀大分子用于肝癌細(xì)胞靶向基因傳遞的研究.pdf

1、基因治療是指通過一定的方式把外源治療基因?qū)氲桨屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷與異常所引起的疾病，進(jìn)而達(dá)到疾病治療目的的一種手段。現(xiàn)在己廣泛應(yīng)用于遺傳病、腫瘤和病毒性疾病的治療當(dāng)中。基因治療的一個(gè)重要問題就是能將治療基因輸送到并進(jìn)入特定的靶細(xì)胞中，使其能在該細(xì)胞中高效表達(dá)，其中基因載體的選擇和構(gòu)建非常關(guān)鍵。
　　 在本文工作中，我們通過在PAMAM表面引入乳糖酸(La)，合成了乳糖酸修飾的聚酰胺-胺(PAMAM)樹狀大分子的新型載

2、體(G5.NH2-La)，并將未修飾的PAMAM樹狀大分子作為對(duì)照來研究乳糖酸的引入對(duì)基因轉(zhuǎn)染及靶向性的影響。通過瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)、原了力顯微鏡形貌測(cè)試、載體/pDNA復(fù)合物粒徑和Zeta電勢(shì)測(cè)定實(shí)驗(yàn)對(duì)不同N/P條件下G5.NH2-La/pDNA復(fù)合物和G5.NH2/pDNA復(fù)合物的物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了表征。然后，通過熒光素酶表達(dá)實(shí)驗(yàn)、綠色熒光蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)、載體/pDNA復(fù)合物細(xì)胞內(nèi)吞及乳糖酸競(jìng)爭(zhēng)性抑制實(shí)驗(yàn)對(duì)G5.NH2-La作為基因轉(zhuǎn)

3、染載體的效率和對(duì)肝癌細(xì)胞的靶向效果進(jìn)行了研究。
　　 研究結(jié)果表明:與第五代聚酰胺一胺樹狀大分子(G5.NH2)載體相比，G5.NH2-La可以更好的與pDNA結(jié)合、形成的復(fù)合物結(jié)構(gòu)更緊密、粒徑和Zeta電勢(shì)均減小，這對(duì)提高基因轉(zhuǎn)染的效率是十分有利的。此外，通過MTT細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，G5.NH2-La對(duì)HepG2細(xì)胞在給定濃度范圍內(nèi)沒有表現(xiàn)出明顯毒性。熒光素酶表達(dá)實(shí)驗(yàn)、綠色熒光蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)均表明了G5.NH2-La作為基因轉(zhuǎn)染