中藥及其相關(guān)產(chǎn)品中多種真菌毒素同步檢測研究.pdf

1、中藥中真菌毒素污染和殘留已給人類帶來嚴(yán)重的安全隱患，世界各國對此已逐步加強(qiáng)重視。但是，中藥基質(zhì)的復(fù)雜性在一定程度上制約了痕量真菌毒檢測的發(fā)展，分析方法仍不能滿足對中藥中真菌毒素的全面篩查。所以，有必要開發(fā)簡單、快速、靈敏的多種真菌毒素同時檢測的分析方法，以保證中藥的質(zhì)量及其用藥安全。主要研究內(nèi)容如下：
　?。?）超高效液相色譜-質(zhì)譜（UFLC-MS/MS）法同時檢測山藥及山藥相關(guān)產(chǎn)品中8種真菌毒素的污染水平。
　　通過對樣品

2、的提取溶劑、提取方法及色譜、質(zhì)譜條件的優(yōu)化，建立了同時檢測山藥及市售山藥相關(guān)產(chǎn)品中黃曲霉毒素（AFB1、AFB2、AFG1、AFG2）、赭曲霉毒素A（OTA）、伏馬菌素（FB1、FB2）和玉米赤霉烯酮（ZEA）等8種真菌毒素污染水平的UFLC-MS/MS方法，并用于實(shí)際樣品的檢測。結(jié)果表明，8種真菌毒素在各自的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（R2）為0.9977~0.9999，檢測限為0.025~0.125 ng/mL，定量限為0.1

3、~0.25 ng/mL，平均回收率均在71.0~106.0％之間。在實(shí)際樣品檢測的實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)5份陽性樣品，不同程度的污染了AFB1、FB1和 FB2，其中2份樣品中的AFB1超過限量標(biāo)準(zhǔn)，但所有的樣品中均未檢測到OTA和ZEA。
　?。?）采用TC-M160真菌毒素多功能凈化柱（MFC）結(jié)合高效液相色譜-在線柱后光化學(xué)衍生-熒光檢測法（HPLC-PCD-FLD）同時測定白芍中4種黃曲霉毒素的殘留量，并以UFLC-MS/MS對陽

4、性樣品進(jìn)行確證。
　　通過對樣品提取溶劑和多功能凈化柱的類型及色譜條的優(yōu)化，建立了同時檢測白芍中4種黃曲霉毒素（AFB1、AFB2、AFG1、AFG2）污染水平的HPLC-PCD-FLD方法，并用于實(shí)際樣品的檢測。結(jié)果表明，4種黃曲霉毒素在各自的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（R2）為0.9993~0.9999，檢測限為0.03~0.18μg/kg，定量限為0.09~0.5μg/kg，平均加樣回收率為80.49~100.41%。

5、樣品檢測結(jié)果顯示有3批藥材被污染黃曲霉毒素，其中1批藥材中污染了4種黃曲霉毒素，污染較為嚴(yán)重。以UFLC-MS/MS方法確證陽性樣品，結(jié)果證明該方法無假陽性。
　?。?）建立免疫磁珠（IMBs）富集凈化結(jié)合超高效液相色譜-熒光檢測法（UPLC-FLD）法快速測定山藥中黃曲霉毒素B1（AFB1）。
　　通過優(yōu)化免疫磁球的制備過程、凈化條件及液相色譜條件，建立了快速測定山藥中AFB1的免疫磁珠富集凈化-UPLC-FLD方法，并用

6、于實(shí)際樣品的檢測。結(jié)果表明，免疫磁珠凈化的最佳條件為：20%甲醇作為免疫磁珠富集體系，室溫條件下吸附富集時間為30 min，以1 mL純甲醇為洗脫溶液，洗脫3次，每次反應(yīng)時間為3 min。UPLC-FLD檢測時，AFB1具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2=0.9993，檢測限和定量限分別為0.3μg/kg和1.0μg/kg，回收率可達(dá)84%以上。實(shí)際樣品檢測發(fā)現(xiàn)2批污染AFB1的樣品，其中1批樣品污染超過限量標(biāo)準(zhǔn)，以UFLC-MS/MS方