基于量子點(diǎn)和生物傳感元件檢測真菌毒素的研究.pdf

1、蓮子為睡蓮科水生草本植物蓮Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥成熟種子，是我國常用的大宗中藥材，由于其極高的藥用和滋補(bǔ)價(jià)值，在食用和醫(yī)療保健中發(fā)揮了十分重要的作用，也是我國中藥材出口創(chuàng)匯的重要品種之一。該品多產(chǎn)于我國湖北、湖南、福建等南方溫濕地區(qū)，富含油脂和淀粉，儲藏不當(dāng)，則易發(fā)生霉變。前期研究，發(fā)現(xiàn)蓮子在采收、儲藏和流通過程中易受真菌毒素污染，嚴(yán)重影響了蓮子藥材的質(zhì)量、安全性和出口創(chuàng)匯。針對蓮子真菌毒素污染研究，尤其

2、以黃曲霉毒素和赭曲霉毒素研究最多，其中黃曲霉毒素，陽性率達(dá)70％，其中30％的樣品中AFB1含量超出了限量標(biāo)準(zhǔn)(5μg/kg)，25％的樣品AFs總量超出了限量標(biāo)準(zhǔn)(10μg/kg)，國外亦有蓮子中黃曲霉毒素污染的報(bào)道，為蓮子的“藥用”和“食用”帶來嚴(yán)重的安全隱患。鑒于蓮子藥材中黃曲霉素和赭曲霉毒素的污染情況，很有必要建立靈敏準(zhǔn)確的快速篩查分析方法，隨行監(jiān)控采收、儲藏和流通過程中藥材真菌毒素的污染狀況，保障藥材質(zhì)量。基于此本論文主要研究

3、內(nèi)容和結(jié)論如下:
　　(1) CdSe/CdS核殼量子點(diǎn)的合成。研究采用液體石蠟作為反應(yīng)溶劑，Cd(DDTC)2為前驅(qū)體，以連續(xù)殼層前驅(qū)體注入方式合成CdSe/CdS核殼型量子點(diǎn)，并采用透射電鏡對其形貌特征進(jìn)行表征。實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了油胺和殼層前驅(qū)體在整個(gè)反應(yīng)體系中的用量，結(jié)果表明，在50％（體積比）油胺和10次前驅(qū)體加入量的條件下，成功制備了點(diǎn)狀CdSe/CdS核殼量子點(diǎn)。
　　(2)基于適配子標(biāo)記量子點(diǎn)檢測OTA。本章首先將油溶

4、性CdSe/CdS量子點(diǎn)轉(zhuǎn)化為可用于生物標(biāo)記的水溶性量子點(diǎn)。其次，通過硫代堿基修飾的ssDNA作為量子點(diǎn)配體，其功能區(qū)含有我們需要標(biāo)記的適配子，“錨”區(qū)作為連接量子點(diǎn)的標(biāo)記區(qū)。通過改變“錨”區(qū)硫代堿基的數(shù)目，達(dá)到控制標(biāo)記在量子點(diǎn)表面ssDNA數(shù)目。最后，我們用優(yōu)化的ssDNA-CdSe/CdS作為生物傳感器，建立OTA的檢測方法，結(jié)果顯示，OTA在1-30 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2＞0.9513)，其線性擬合方程為y=4.75

5、x+323.18，滿足限量標(biāo)準(zhǔn)5 ng/mL的檢測要求。
　　(3)建立間接競爭酶聯(lián)免疫吸附法快速篩檢蓮子中黃曲霉毒素B1的污染水平。本法采用間接競爭酶聯(lián)免疫法測定了經(jīng)甲醇-水(80∶20)溶液提取后蓮子藥材中的黃曲霉毒素B1。通過對包被抗原和一抗工作濃度進(jìn)行優(yōu)化，建立了最佳ic-ELISA法，結(jié)果顯示，AFB1在0.171～7.25 ng/mL之間線性關(guān)系良好，R2＞0.978，IC50為1.29 ng/mL，回收率在74.73

6、％～126.9％之間，該法檢測限為0.128 ng/mL。應(yīng)用該法檢測20批蓮子藥材，結(jié)果顯示:1～15號樣品（30℃、30％濕度條件下貯藏一年）中AFB1污染水平為1.19～115.3μg/kg，40％樣品中AFB1含量超過限量標(biāo)準(zhǔn)，16～20號樣品（新購買）中AFB1污染率為40％。對上述結(jié)果采用液質(zhì)聯(lián)用確證，樣品中AFB1與標(biāo)品具有相同的保留時(shí)間、離子碎片、離子碎片豐度比，排除了假陽性的檢測結(jié)果。表明本研究建立的ic-ELISA分