基于量子點(diǎn)的陽(yáng)極溶出伏安法檢測(cè)黃曲霉毒素B1.pdf

1、黃曲霉毒素毒性大，具有很強(qiáng)的致癌性、致突變性、致畸性。黃曲霉毒素的超標(biāo)不僅嚴(yán)重危害人們的身體健康，更降低了我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品的國(guó)際市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。由于國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，國(guó)內(nèi)檢測(cè)合格的產(chǎn)品在國(guó)外并不達(dá)標(biāo)，西方先進(jìn)國(guó)家更是借此實(shí)施貿(mào)易壁壘，給我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品的出口造成了巨大損失。
　　黃曲霉毒素中黃曲霉毒素 B1（AFB1）的毒性最強(qiáng)，污染最嚴(yán)重，常以 AFB1為主要指標(biāo)作，評(píng)價(jià)黃曲霉毒素污染。世界各國(guó)均針對(duì)食品中 AFB1的最大檢出量制定了嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)

2、，這對(duì)檢測(cè)方法的靈敏度提出了較高要求。目前，AFB1的檢測(cè)方法主要有薄層層析法（TLC）、高效液相色譜法（HPLC）及免疫分析法等。其中酶聯(lián)免疫法操作簡(jiǎn)單、特異性強(qiáng)、測(cè)定快速，在食品安全檢測(cè)中有著廣泛的應(yīng)用。但在實(shí)際應(yīng)用中存在一系列問(wèn)題，如酶的活性易受反應(yīng)條件影響，試劑的壽命較短，顯色液需要低溫保存等，這些問(wèn)題的存在限制了方法的實(shí)際應(yīng)用。
　　量子點(diǎn)是一種新興的納米材料，具有良好的光學(xué)特性和電化學(xué)性質(zhì)，將量子點(diǎn)作為標(biāo)記物結(jié)合到 A

3、FB1的單克隆抗體（MAb）上，利用電化學(xué)方法測(cè)定量子點(diǎn)中的金屬含量，從而間接測(cè)定出樣品中 AFB1的濃度。通過(guò)這種方法可以改善酶聯(lián)免疫法存在的問(wèn)題，并能有效地提高檢測(cè)方法的靈敏度。本文主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)論如下：
　　1、MAb-PbS偶聯(lián)物的制備
　　以巰基乙酸為穩(wěn)定劑，Pb(NO3)2、Na2S為原料，在常溫、常壓，穩(wěn)定劑用量為11μL，pH9.5的條件下合成了粒徑均勻、水溶性好的PbS量子點(diǎn)，通過(guò)透射電鏡、XRD衍射等對(duì)

4、PbS量子點(diǎn)表征可知，制得的量子點(diǎn)分散均勻，平均粒徑約為3-5nm，屬面心立方晶系。采用共價(jià)結(jié)合的方式，以NDC、NHS為交聯(lián)劑將制得的PbS量子點(diǎn)與MAb（1.0mg/mL）偶聯(lián)，制備了MAb-PbS QDs偶合物，通過(guò)熒光光譜、生物活性鑒定，表明PbS量子點(diǎn)成功標(biāo)記到了MAb上，偶聯(lián)量子點(diǎn)后的MAb效價(jià)雖有所降低，但仍然保持著特異性結(jié)合的生物活性，為建立AFB1的電化學(xué)免疫分析方法奠定了基礎(chǔ)。
　　2、同位鍍汞陽(yáng)極溶出伏安法的

5、條件優(yōu)化
　　以底液、pH、汞液濃度、富集電位、富集時(shí)間、攪拌速度、方波頻率、電位增量、方波幅度為影響因素進(jìn)行條件優(yōu)化。得到最優(yōu)條件為：底液為HAc-NaAc緩沖溶液，pH4.5，汞液濃度1mg/mL，富集電位-1.0V，富集時(shí)間240s，電極旋轉(zhuǎn)速度400r/min，方波頻率30Hz，電位增量4mV/s，方波幅度25mV。在此條件下，峰電流 i與Pb濃度 C之間存在較好的正相關(guān)，線性范圍1～80μg/L，I（μA）=1.136+

6、0.2175C（μg/L），相關(guān)系數(shù)為0.9963，檢測(cè)限0.3μg/L。
　　3、基于MAb-PbS的電化學(xué)免疫檢測(cè) AFB1的新方法的建立
　　成功建立了基于 MAb-PbS的電化學(xué)免疫檢測(cè) AFB1的新方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在孵育時(shí)間為60min，MAb-PbS的稀釋倍數(shù)為5時(shí)，電流信號(hào)最大；在此條件下，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢測(cè)的線性范圍為0.1-30ng/mL，IC50為0.814μg/L，檢出限為0.046μg/L； AFB

7、1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1與AFB1單抗的交叉反應(yīng)率分別為100％、11%、2.6%、5.7%，3.5%；花生樣品中 AFB1的加標(biāo)回收率為91.4%-103.1%；檢測(cè)結(jié)果與HPLC的結(jié)果比對(duì)，具有很好的一致性，無(wú)顯著差異。綜上，基于MAb-PbS的電化學(xué)競(jìng)爭(zhēng)免疫檢測(cè)法靈敏度高、檢測(cè)限低、特異性強(qiáng)、方法結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可以作為AFB1的檢測(cè)方法。將電化學(xué)免疫檢測(cè)法和 PbS熒光檢測(cè)法對(duì)比發(fā)現(xiàn)，IC50從5.003μg/

8、L降為0.814μg/L，檢測(cè)限從0.212μg/L降為0.046μg/L，表明電化學(xué)免疫檢測(cè)法具有更高的靈敏度，更低的檢測(cè)限。
　　4、基于MAb-(PbS)2的電化學(xué)免疫檢測(cè) AFB1的新方法的建立
　　通過(guò)層層自組裝技術(shù)，利用鏈霉親和素-生物素體系合成了 MAb-(PbS)2，并以此為信號(hào)探針，建立了 AFB1的電化學(xué)競(jìng)爭(zhēng)免疫檢測(cè)的新方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出，線性范圍為：0.04-15ng/mL，IC50為0.266μg/L