放射損傷細(xì)胞中高爾基體彌散現(xiàn)象及其機(jī)制的研究.pdf

1、高爾基體是細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng)中重要的細(xì)胞器，參與了細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的加工、分泌和囊泡運(yùn)輸?shù)冗^(guò)程。近年發(fā)現(xiàn)，DNA損傷可以引起高爾基體的重組，使其片段化并分散到整個(gè)細(xì)胞之中，并認(rèn)為這種高爾基體結(jié)構(gòu)的變化可能與受照細(xì)胞的存活有關(guān)。盡管此研究結(jié)果發(fā)表在著名的“細(xì)胞”雜志上，但相關(guān)領(lǐng)域的研究報(bào)道到目前為止仍然很少。高爾基體的結(jié)構(gòu)變化是否真正參與了細(xì)胞存活反應(yīng)，或僅僅是細(xì)胞放射損傷后亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生的一種伴隨反應(yīng)，本文將以此為切入點(diǎn)，探索放射損傷后高爾基體的

2、彌散現(xiàn)象以及對(duì)其機(jī)制進(jìn)行探討。
　　目的：
　　通過(guò)觀察輻射對(duì)高爾基體形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，了解高爾基體彌散的機(jī)制以及對(duì)彌散效應(yīng)和生物學(xué)意義進(jìn)行初步探討。
　　方法：
　　采用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)放射損傷細(xì)胞中高爾基體彌散現(xiàn)象并對(duì)彌散面積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化，克隆形成實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞存活率，Western Blot檢測(cè)高爾基體蛋 GOLPH3及 DNA斷裂損傷標(biāo)志物γH2AX的表達(dá)，采用RT-PCR檢測(cè)輻射

3、細(xì)胞后miRNA分子 miR-378e、miR-486-3p表達(dá)變化及其靶蛋白GOLPH3L、MYO18A表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示，照射后高爾基體的彌散面積增加，具有一定的劑量效應(yīng)和時(shí)間效應(yīng)關(guān)系；具有激活 DNA-PKcs的放射損傷防護(hù)劑香蘭素衍生物VND3207能夠減輕γ射線對(duì)高爾基體的損傷，其表現(xiàn)為與未加藥組相比，VND3207能抑制不同劑量照射后高爾基體彌散面積的增加，同時(shí)促進(jìn)了受照細(xì)胞的存活；

4、細(xì)胞周期測(cè)定結(jié)果顯示，4Gyγ射線照射后G2/M期阻滯峰值出現(xiàn)在12h左右；免疫印跡結(jié)果顯示DNA損傷引起的G2/M期阻滯也在12h后解除；而高爾基體彌散在細(xì)胞周期阻滯解除后如照射后24h甚至更長(zhǎng)時(shí)間仍然存在。
　　RT-PCR結(jié)果顯示，4Gy、10Gy照射后，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）中miR378e、miR486-3p和GOLPH3L及MYO18A mRNA分子有表達(dá)上調(diào)的趨勢(shì)，12h趨勢(shì)明顯；免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染m

5、iR378e、miR486-3p、siGOLPH3L后的細(xì)胞中，高爾基體呈現(xiàn)彌散的趨勢(shì)；細(xì)胞周期結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染 siGOLPH3L、siMYO18A能延長(zhǎng)細(xì)胞照射后G2/M期的阻滯；同時(shí)觀察到，轉(zhuǎn)染miR378e、miR486-3p、siGOLPH3L、siMYO18A后，受照細(xì)胞的存活率降低。
　　結(jié)論：
　　1.γ射線照射后，細(xì)胞高爾基體出現(xiàn)彌散現(xiàn)象，且具有一定的劑量效應(yīng)和時(shí)間效應(yīng)。
　　2.高爾基體的彌散現(xiàn)象與細(xì)

6、胞周期G2/M期阻滯相關(guān)，但在輻射損傷中的高爾基彌散與周期阻滯沒有因果關(guān)系。
　　3.高爾基體的彌散與細(xì)胞所受損傷程度相關(guān)，輻射防藥物VND3207能抑制彌散。
　　4. DNA-PKcs抑制劑NU7441抑制了DNA損傷的修復(fù)，也抑制了高爾基體彌散。
　　5.高爾基體蛋白 GOLPH3，在照射后表達(dá)下調(diào)，可被 DNA-PKcs敲低抑制下調(diào)。
　　6. miRNA分子miR-378e、miR-486-3p在高爾基