shRNA抑制高爾基體α-甘露糖苷酶II基因的表達對胃癌細胞的侵襲力的影響及機制.pdf

1、目的:
　　初步研究分析，在中、低兩種分化人胃癌細胞系中，高爾基體α-甘露糖苷酶Ⅱ(GMⅡ)各自的差異表達，以探討GMⅡ在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:
　　1.應用陽離子脂質體技術手法，將合成的GMⅡ靶向基因pGPU6/GFP/Neo-GMⅡ編號1406，分別同時轉染至低分化胃癌細胞MGC-803和中分化胃癌細胞SGC-7901中，并借助熒光倒置顯微鏡觀察熒光顯示并計算轉染率，最后經(jīng)過G418篩選出穩(wěn)定轉染的細胞

2、株。
　　2.利用Western-blot和RT-PCR檢測轉染以后兩株細胞中GMⅡ和E-cadherin、α-catenin蛋白及mRNA表達變化情況。
　　3.同時利用體外細胞劃痕試驗和Transwell細胞小室侵襲實驗來測定并比較GMⅡ被靶向沉默后，不同分化細胞及其對照組的侵襲能力。
　　結果:
　　GMⅡ shRNA轉染后胃癌MGC-803和SGC-7901細胞的GMⅡ的蛋白和mRNA表達明顯抑制，E-c

3、adherin和α-catenin的蛋白表達明顯升高(P＜0.05);細胞劃痕實驗結果顯示，GMⅡ shRNA質粒轉染組與其相應對照組比較，沉默GMⅡ后兩種分化的胃癌細胞侵襲力都有所下降(P＜0.05)，Transwell細胞小室侵襲實驗:GMⅡ shRNA組胃癌細胞較空白對照組，陰性對照組(shNC)細胞侵襲能力都明顯降低，18h穿過Transwell的細胞數(shù)分別為:（65±5），（197±6），（186±5）;（72±4），（178