GRASP65的表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響及機(jī)制.pdf

1、目的：
　　探討高爾基體堆疊蛋白65（Golgi reassembly stacking protein65，GRASP65）在體外對(duì)人類來(lái)源的胃癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲能力的影響及其機(jī)制。
　　方法：
　　首先，通過(guò)Western Blot和RT-qRCR鑒別低、中、高分化（MKN-45、SGC-7901、MKN-28）和正常胃黏膜細(xì)胞GES-1中GRASP65蛋白質(zhì)和mRNA的表達(dá)量。然后，用特異性siRNA片

2、段和質(zhì)粒通過(guò)Lipofectamine2000進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，分別下調(diào)和上調(diào)MKN-45和MKN-28中GRASP65的表達(dá)量。用RT-qPCR和Western Blot試驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后GRASP65的mRNA和蛋白表達(dá)量用以證實(shí)轉(zhuǎn)染成功。實(shí)驗(yàn)分為上調(diào)和下調(diào)兩部分，又各自分為實(shí)驗(yàn)組（GRASP65 siRNA組/GRASP65 plasmid組）、陰性對(duì)照組（Control siRNA組/Empty vector組）和空白對(duì)照組（MKN-

3、45/MKN-28）3組。最后，用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8（CCK-8）、流式細(xì)胞術(shù)（FCM）、Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后各組胃癌細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲能力，以及Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后各組細(xì)胞GM130、MMP-9和MMP-2的蛋白質(zhì)表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　Western Blot和 RT-qRCR結(jié)果顯示MKN-45細(xì)胞和SGC-7901細(xì)胞中GRASP65的蛋白和mRNA表達(dá)量

4、均明顯高于MKN-28細(xì)胞和GES-1細(xì)胞中GRASP65的蛋白和mRNA表達(dá)量（P＜0.05）,故選擇MKN-45和MKN-28作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，分別下調(diào)和上調(diào)GRASP65的表達(dá)量。RT-qPCR和Western Blot結(jié)果證明瞬時(shí)轉(zhuǎn)染成功，用特異性片段轉(zhuǎn)染過(guò)的細(xì)胞GRASP65的mRNA和蛋白表達(dá)量與另外兩個(gè)對(duì)照組對(duì)比有顯著差異（P＜0.05）。CCK-8、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)均證明，下調(diào)GRASP65的表達(dá)