高爾基體糖蛋白73對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值研究.pdf

1、背景：
　　原發(fā)性肝癌（以下簡(jiǎn)稱:肝癌）是世界上常見的10種惡性腫瘤之一，死亡率位居全球第二。我國(guó)是肝癌的高發(fā)地區(qū)，約55％新發(fā)病例和死亡病例發(fā)生在中國(guó)，而且仍然呈上升趨勢(shì)。肝癌起病隱匿，臨床上約有2/3的肝癌患者初診時(shí)已屬中晚期，失去了手術(shù)切除病灶的機(jī)會(huì)，預(yù)后差。提高肝癌的整體治療水平重在早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療。甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)是診斷肝癌的重要指標(biāo)，但仍有一定局限性:臨床上有近1/3的肝癌患者AFP

2、呈陰性或低濃度陽(yáng)性，而且急性病毒性肝炎、慢性活動(dòng)性肝炎、肝硬化活動(dòng)期以及睪丸癌或卵巢癌等非肝癌疾病通常也出現(xiàn)AFP升高，可見AFP作為肝癌早期診斷的標(biāo)記物尚不夠理想。因此，尋找新的更加敏感和特異的肝癌血清標(biāo)記物一直是肝癌研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)。高爾基體糖蛋白73(golgiprotein-73，GP73)是新近發(fā)現(xiàn)的與肝癌關(guān)系密切的糖蛋白，現(xiàn)有的一些研究報(bào)道顯示GP73是一個(gè)有重大潛在價(jià)值的肝癌標(biāo)志物，敏感度和特異度均超過AFP，有望成為新的

3、更好的早期診斷肝癌或預(yù)警的肝癌標(biāo)志物。由于廣西是我國(guó)原發(fā)性肝癌最高發(fā)的幾個(gè)省市地區(qū)之一，肝癌已成為廣西的常見病和多發(fā)病，而且廣西肝癌年死亡率高達(dá)34.39/10萬(wàn)，占全部惡性腫瘤死亡率的30.70％，高居廣西腫瘤死因譜首位。因此，在廣西開展GP73對(duì)肝癌診斷價(jià)值的研究非常具有區(qū)域代表性和獨(dú)特性，為GP73早日成為臨床應(yīng)用的肝癌診斷標(biāo)志物提供重要的參考依據(jù)?；谝陨涎芯克悸?，本課題以廣西地區(qū)肝癌患者為研究對(duì)象，探索GP73在肝癌診斷中的價(jià)

4、值。
　　方法：
　　一、肝癌組織中GP73的表達(dá)
　　1.采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)92例肝癌組織、癌旁組織及29例正常肝組織中GP73及AFP表達(dá)強(qiáng)度;分析GP73表達(dá)程度與肝癌臨床病理特征的關(guān)系。
　　2.采用蛋白免疫印跡(Western Blotting)法檢測(cè)92例肝癌組織、癌旁組織及29例正常肝組織中GP73表達(dá)，將檢測(cè)結(jié)果與免疫組化結(jié)果進(jìn)行相關(guān)分析。
　　二、肝癌患者血清GP73的表達(dá)水平

5、r>　　收集外周血血清共1201例，包括肝癌403例，肝硬化162例，乙型病毒性肝炎200例，乙肝病毒攜帶者107例，肝良性占位39例，其他惡性腫瘤140例和健康對(duì)照150例。應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫定量測(cè)定(ELISA)方法檢測(cè)血清中GP73水平，電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清中AFP水平。
　　三、肝癌術(shù)后患者及肝癌高危人群血清GP73水平動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)
　　1.對(duì)79例肝癌患者手術(shù)前后進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察，采集患者術(shù)前及術(shù)后多次復(fù)查的血清標(biāo)本，

6、采用ELISA方法檢測(cè)血清GP73水平，電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清中AFP水平，監(jiān)測(cè)GP73和AFP變化情況。
　　2.對(duì)132例肝癌高危人群進(jìn)行定期隨訪，復(fù)查時(shí)采集受試者血清標(biāo)本，采用ELISA方法檢測(cè)血清中GP73水平。
　　結(jié)果：
　　一、肝癌組織中GP73的表達(dá)
　　1.免疫組化檢測(cè)結(jié)果:
　?、貵P73在肝癌組織、癌旁組織中表達(dá)增高，陽(yáng)性率分別為97.8％及92.3％，顯著高于AFP（97.8％ vs.

7、71.7％，92.3％ vs.54.3％，P＜0.05）。正常肝臟組織中GP73及AFP染色均為陰性。
　?、贕P73表達(dá)強(qiáng)度與肝癌病理分級(jí)、Child-Pugh分級(jí)呈正相關(guān)，P＜0.05。
　?、跥P73在肝癌組織中表達(dá)與年齡、性別、血清AFP濃度、腫瘤大小、肝硬化、HBV感染、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、門脈癌栓及臨床分期各因素?zé)o明顯相關(guān)性。
　　2.Western Blotting方法檢測(cè)結(jié)果:
　?、貵P73在肝癌組

8、織中灰度值為12.90±27.81;癌旁組織為6.28±23.22;正常肝組織為1.58±7.58。肝癌組織中GP73表達(dá)量顯著高于癌旁組織和正常肝組織，而癌旁組織中GP73水平較正常肝組織亦明顯升高（P均＜0.05)。
　?、诟鹘M灰度值與免疫組化檢測(cè)GP73表達(dá)強(qiáng)度成正相關(guān)，GP73表達(dá)越強(qiáng)，灰度值越高。
　　二、肝癌患者血清GP73的表達(dá)水平
　　1.肝癌組血清GP73水平顯著高于肝硬化組、乙型肝炎組、乙肝攜帶者組

9、、肝良性占位組、其他惡性腫瘤組及健康志愿者組（324.38±56560.00 vs.93.12±4072.77，23.48±146.82，16.63±137.73，6.84±37.57，7.22±88.49，12.68±79.36，P＜0.05）。
　　2.通過受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲線設(shè)定65.25ng/mL為臨界值，GP73診斷肝細(xì)胞癌的敏感度和特異度分別為

10、82.3％和82.7％，顯著高于AFP（72.2％和79.4％），P＜0.05; GP73和AFP曲線下面積為0.865和0.792(P＜0.05)。
　　3.肝癌組AFP≤39.32 ng/mL共112例，其中84.0％(94/112)患者的GP73＞65.32 ng/mL。
　　4.聯(lián)合檢測(cè)GP73和AFP診斷肝癌的敏感度提高到94.4％，特異度為73.2％，陰性預(yù)測(cè)值達(dá)到0.970，Youden指數(shù)提高到0.676。<

11、br>　　5.肝癌組中小肝癌共75例，其中GP73＞65.25 ng/mL有49例，AFP＞39.32ng/mL為35例，GP73對(duì)小肝癌檢出率高于AFP，P＜0.05。
　　6.相關(guān)性分析結(jié)果表明，各組待檢者血清GP73與AFP表達(dá)水平之間均無(wú)相關(guān)性。
　　三、肝癌術(shù)后患者及肝癌高危人群血清GP73水平動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)
　　1.對(duì)79例手術(shù)患者術(shù)后進(jìn)行定期追蹤隨訪8個(gè)月，中位隨訪時(shí)間8個(gè)月，終末隨訪率為84.8％。手術(shù)前GP

12、73陽(yáng)性的肝癌組患者血清GP73在術(shù)后第1～8周下降明顯，之后都維持在一個(gè)較低水平。手術(shù)前GP73陰性的肝癌患者手術(shù)后血清GP73無(wú)顯著降低，其中5例患者檢測(cè)到術(shù)后第1周時(shí)GP73較術(shù)前升高，但隨后在第2～8周內(nèi)明顯下降至正常水平。
　　2.隨訪過程中發(fā)現(xiàn)3例復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移患者，其血清GP73水平都較前升高，但對(duì)復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移前后GP73檢測(cè)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P=0.111。其中1例為AFP陰性病例，從初次就診檢查至術(shù)后第28周復(fù)發(fā)，

13、多次檢測(cè)患者血清AFP均為陰性。但患者血清GP73在術(shù)前已經(jīng)顯著升高（317.89 ng/mL），術(shù)后一直維持在較高水平，在第24周復(fù)查時(shí)GP73已經(jīng)較前一次復(fù)查有所升高（第16周為47.3 ng/mL，第24周為57.29 ng/mL），至第28周確認(rèn)復(fù)發(fā)時(shí)血清GP73進(jìn)一步升高(139.66 ng/mL)。
　　3.對(duì)132例肝癌高危人群患者進(jìn)行追蹤隨訪6個(gè)月，中位隨訪時(shí)間6個(gè)月，終末隨訪率為72.0％，進(jìn)行復(fù)查1次，未發(fā)現(xiàn)新

14、發(fā)肝癌病例。復(fù)查前后血清GP73水平為20.13±323.86和23.17±297.30，P=0.000，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.GP73在肝癌和癌旁組織中表達(dá)升高，在肝癌組織表達(dá)陽(yáng)性率高于AFP。GP73表達(dá)強(qiáng)度與Child-Pugh分級(jí)及肝癌的病理分級(jí)呈正相關(guān)。
　　2.GP73可作為一種新的、較好的診斷肝癌的血清標(biāo)志物，其敏感度和特異度優(yōu)于AFP，可提高血清AFP陰性的肝癌患者的診斷率;GP73對(duì)