高爾基體駐膜糖蛋白GP73啟動(dòng)子的研究及其在靶向肝癌腺病毒治療中的應(yīng)用.pdf

1、本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫(xiě)，我對(duì)所寫(xiě)的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名王l詩(shī)日期：2014年2月28日浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文高爾基體駐膜糖蛋白GP73啟動(dòng)子的研究及其在靶向肝癌細(xì)胞治療中的應(yīng)用摘要癌癥

2、是人類(lèi)疾病中僅次于心血管疾病的第二大殺手，嚴(yán)重威脅著人們的生命健康和安全。在我國(guó)癌癥發(fā)病率正呈現(xiàn)出逐年增加的趨勢(shì)，并且越來(lái)越年輕化。肝癌在我國(guó)的死亡率居所有惡性腫瘤第二位，目前，對(duì)于肝癌的治療主要以手術(shù)切除、化療和放療為常用治療方式，其中手術(shù)切除對(duì)于早期患者來(lái)說(shuō)是可行的，但是對(duì)于大多數(shù)患者是不現(xiàn)實(shí)的，尤其是肝癌晚期，傳統(tǒng)的治療方法已難以奏效，迫切需要新的技術(shù)來(lái)提高患者的生活質(zhì)量和生存率?；诎┌Y的靶向基因病毒治療(targetingge

3、ne—virotherapy)的策略，以病毒為載體聯(lián)合基因治療和病毒治療的優(yōu)勢(shì)，為腫瘤治療帶來(lái)了新的希望。高爾基體駐膜糖蛋白(GP73)是近年發(fā)現(xiàn)的一種糖蛋白。研究發(fā)現(xiàn)，GP73是一種很好的肝癌標(biāo)志物，其靈敏性和特異性均高于傳統(tǒng)肝癌標(biāo)記物AFP，分別達(dá)到75％和97％，而AFP僅為58％和85％?；谶@一特性，本論文首先克隆了GP73啟動(dòng)子序列，通過(guò)DualLuciferase雙熒光報(bào)告系統(tǒng)，對(duì)其活性進(jìn)行了檢測(cè)，篩選出較高啟動(dòng)子活性的6

4、59bp核心序列。隨后，基于Adeasy腺病毒系統(tǒng)和課題組現(xiàn)有溶瘤腺病毒ZD55，我們將腺病毒內(nèi)源型E1A啟動(dòng)子替換成GP73啟動(dòng)子，構(gòu)建了肝癌特異GP73啟動(dòng)子調(diào)控E1A區(qū)并刪除E1855kDa和E3區(qū)的選擇性復(fù)制型溶瘤腺病毒GD55，以及攜帶EGFP綠色熒光蛋白的腺病毒GD55EGFP。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，GD55系統(tǒng)較ZD55系統(tǒng)具有良好的肝癌特異性增殖能力，顯示了其靶向性殺傷肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的效應(yīng)，并且對(duì)肝正常細(xì)胞的毒性較小；進(jìn)一步的