肝癌及癌旁肝組織的高爾基體差異蛋白質(zhì)分析.pdf

1、目的：建立一種行之有效的肝癌及癌旁肝組織高爾基體比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法。篩選并鑒定肝癌及癌旁肝組織高爾基體蛋白質(zhì)組中差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，從高爾基體層面解釋肝癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，為肝癌的早期診斷和抗癌藥物的研發(fā)提供線索。
　　 方法：應(yīng)用亞細(xì)胞比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法，比較分析肝癌及癌旁肝組織高爾基體蛋白質(zhì)組。收集肝癌患者手術(shù)切除的癌組織和癌旁肝組織標(biāo)本，蔗糖密度梯度離心法分離純化高爾基體。建立并優(yōu)化兩種組織高爾基體的雙向電泳方法，銀染

2、后用PD-Quest軟件分析找出差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)，然后用質(zhì)譜儀獲取相應(yīng)蛋白點(diǎn)的肽質(zhì)指紋圖譜，聯(lián)網(wǎng)到Swiss-Prot蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定獲得的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，最后用Western blot驗(yàn)證雙向電泳結(jié)果。蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)量的比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：有效的分離出了高純度的高爾基體，應(yīng)用雙向凝膠電泳獲得了分辨率和重復(fù)性均較好的雙向電泳銀染圖譜。肝癌組織和癌周肝組織平均每張蛋白斑點(diǎn)數(shù)分別為（1153±49）個(gè)和（1086±3

3、7）個(gè)，與癌旁肝組織高爾基體蛋白質(zhì)組相比，肝癌組織高爾基體蛋白質(zhì)組有27個(gè)蛋白位點(diǎn)表達(dá)上調(diào)，20個(gè)蛋白位點(diǎn)表達(dá)下調(diào)。通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)搜索，初步鑒定出了其中17個(gè)蛋白質(zhì)，并用Western blot從蛋白水平上驗(yàn)證了雙向凝膠電泳結(jié)果。
　　 結(jié)論：肝癌及癌旁肝組織高爾基體蛋白質(zhì)組具有不同的蛋白質(zhì)位點(diǎn)，這些差異表達(dá)的蛋白質(zhì)涉及到細(xì)胞的能量代謝、腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，細(xì)胞周期調(diào)控等方面，為進(jìn)一步闡釋高爾基體在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中所起的作用提供了有價(jià)