喉癌及喉正常粘膜組織的差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文喉癌及喉正常粘膜組織的差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析姓名：劉玲申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：耳鼻咽喉科學(xué)指導(dǎo)教師：趙長青20050519l l ‘西醫(yī)科，博硪士學(xué)位論文④選分辨較女f 的3 7 個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)并切割，進(jìn)行脫色、還原、酶解、萃取、脫鹽后點(diǎn)樣于不銹鋼板上．空氣中千燥后備，H 。制備好的樣品在質(zhì)譜儀上分析，獲得肽質(zhì)量指紋圖。⑤用M a s c o t d i s t i l l e F 軟件識別其有效肽片段峰后，按一定條

2、件用M a s c o t 軟件在數(shù)據(jù)庫巾搜尋與肽質(zhì)指紋圖相匹配的蛋白質(zhì)。研究結(jié)果：①通過2 - D E 獲得了背景清晰、分辨率較高、重復(fù)性較好的喉癌及對應(yīng)正常喉粘膜組織的雙向凝膠銀染參考幽潛。⑦使用P D q u e s t 雙向凝膠電泳圖像分析軟件對E 述兩種組織的蛋白表達(dá)圖譜分別進(jìn)行分析：凝膠蛋白質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)日分析發(fā)現(xiàn)，同?病例的癌組織和正常喉耥膜上皮組織各3 塊凝膠蛋臼質(zhì)點(diǎn)數(shù)分別為j 5 0 4 ±1 2 2 和1 2 3

3、 5 ±1 6 4 ，平均匹配的點(diǎn)數(shù)分別為1 3 0 5 ±1 4 3 和1 0 6 6 ±8 2 ，匹配率達(dá)到8 7 ％和8 6 ．3 ％；P D q u e s t 能夠自動(dòng)過濾背景，識別蛋白質(zhì)斑點(diǎn)。相同實(shí)驗(yàn)條件和參數(shù)設(shè)置條件下，在一對組織中表達(dá)量相差3 倍以I ：，重復(fù)三次均如此，并在至少5 對組織中有相同變化的點(diǎn)，視為差異蛋白質(zhì)點(diǎn)。③從差異蛋白質(zhì)斑點(diǎn)中選取分辨清楚的點(diǎn)并在喉癌及正常粘膜組織凝膠圖像中

4、標(biāo)記．切取相應(yīng)斑點(diǎn)進(jìn)行M A L D I —T O F - M S 分析，測定蛋白質(zhì)點(diǎn)的肽質(zhì)量指紋圖。以空白膠作陰性對照。實(shí)驗(yàn)中共選3 7 個(gè)兩種組織的差異蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行分析，共獲得3 2 張肽質(zhì)量指紋圖，陰性對照朱見有效肽片段峰。經(jīng)M a s c o t D i s t i l l e r 軟件識別其有效肽片段峰后查詢數(shù)據(jù)庫，搜索后匹配到蛋白質(zhì)的點(diǎn)有3 2 個(gè)。④通過網(wǎng)上查詢S W I S S ．P R O T 等數(shù)據(jù)庫獲得3 2 個(gè)

5、差異蛋白質(zhì)點(diǎn)相應(yīng)的功能注釋，初步鑒定出一些與細(xì)胞代謝、腫瘤增生等有關(guān)的蛋白質(zhì)。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)采用雙向電泳技術(shù)得到了喉癌組織和正常喉粘膜組織的蛋白質(zhì)表達(dá)圖譜，并通過凝膠圖像分析找到兩者之問的差異蛋白。經(jīng)質(zhì)譜分析及生物信息學(xué)技術(shù)初步鑒定了部分差異蛋白質(zhì)，其中一些可能與喉癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，為建立喉癌蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫、從整體上認(rèn)識喉癌以及探索喉癌早期診斷、治療等理論提供了有意義的資料。這些蛋白能否作為喉癌診斷的標(biāo)記物和治療的靶標(biāo)，值得進(jìn)一步研究。