HPV高低危基因型感染宮頸組織的比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析及其差異.pdf

1、第一部分 目的：研究HPV感染宮頸組織后蛋白質(zhì)組表達(dá)情況，初步探討高、低危基因型感染宮頸組織后表達(dá)的差異，并對(duì)差異的蛋白點(diǎn)通過(guò)質(zhì)譜分析其意義。 方法：首先采用測(cè)序法及l(fā)uminex法對(duì)42例臨床HPV感染的標(biāo)本進(jìn)行高、低?；蚍中?，分成HPV高危基因型感染宮頸組織的CIN組，低危基因型感染宮頸組織的CA組，每組篩選出3例標(biāo)本，打成混合池，與正常對(duì)照3例標(biāo)本混合池進(jìn)行雙向凝膠電泳，比較之間的差異，選取差異大的蛋白點(diǎn)

2、，進(jìn)行MALDI-TOF質(zhì)譜分析。 結(jié)果： 1.對(duì)HPV感染陽(yáng)性的31例女性泌尿生殖道尖銳濕疣和11例宮頸CIN組織標(biāo)本，通過(guò)測(cè)序法和luminex法分型的結(jié)果為：(1)尖銳濕疣標(biāo)本(無(wú)論長(zhǎng)在什么部位)或CIN Ⅰ標(biāo)本，其HPV感染的基因型均為6、11等低危型，測(cè)序表現(xiàn)出的是單一峰型，而宮頸CIN Ⅱ～Ⅲ，其HPV感染的基因型均為16、18、33、58等高危型或高危型的混合感染，測(cè)序表現(xiàn)出的是單峰或雜峰；(2)外陰和宮頸

3、同時(shí)患有尖銳濕疣的標(biāo)本，其HPV感染的基因型是一致的。 2.將每組篩選的3例標(biāo)本打成混合池，并對(duì)宮頸尖銳濕疣、宮頸CIN及對(duì)照宮頸上皮組織蛋白質(zhì)組圖譜進(jìn)行兩兩比較，HPV低?；蛐透腥镜膶m頸尖銳濕疣組織標(biāo)本與正常宮頸組織標(biāo)本相比有63個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)有顯著差異，其差異倍數(shù)最大的為20.2939，宮頸尖銳濕疣組表達(dá)上調(diào)的蛋白點(diǎn)有51個(gè)，下調(diào)的有12個(gè)蛋白點(diǎn)；HPV高危基因型感染的宮頸CIN組織標(biāo)本與正常宮頸組織標(biāo)本相比有47個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)有

4、顯著差異，宮頸CIN表達(dá)上調(diào)的蛋白點(diǎn)有21個(gè)，下調(diào)的有26個(gè)蛋白點(diǎn)，上調(diào)倍數(shù)最大的為11.2506倍，下調(diào)倍數(shù)最大的為9.00021倍。HPV高危基因型感染的宮頸CIN組織標(biāo)本與低?；蛐透腥镜膶m頸尖銳濕疣組織標(biāo)本相比有39個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)有顯著差異，宮頸CIN組較宮頸濕疣組表達(dá)上調(diào)的蛋白點(diǎn)有15個(gè)，下調(diào)的有24個(gè)蛋白點(diǎn)，上調(diào)倍數(shù)最大的為4.24857倍，下調(diào)倍數(shù)最大的為3.37334倍。 3.對(duì)3組26個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行分析，獲得了

5、22張肽質(zhì)量指紋圖，軟件識(shí)別其有效肽片段峰后查詢數(shù)據(jù)庫(kù)，搜索后得到匹配的有18個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)，并通過(guò)查詢NCBInr數(shù)據(jù)庫(kù)，獲得初步鑒定的18個(gè)蛋白質(zhì)的功能信息。它們主要與細(xì)胞代謝、信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞分泌、細(xì)胞骨架構(gòu)建及細(xì)胞增值、分化與凋亡等相關(guān)。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)采用雙向凝膠電泳技術(shù)得到了HPV高、低?；蛐透腥緦m頸組織和正常宮頸上皮組織的蛋白組表達(dá)圖譜，并找到兩者之間的差異蛋白點(diǎn)。通過(guò)質(zhì)譜分析及生物信息學(xué)技術(shù)鑒定了部分差異蛋白，其中一些可能與宮頸腫

6、瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。為HPV感染宮頸組織的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)的建立提供了有意義的資料。這些蛋白點(diǎn)能否作為診斷的標(biāo)記物和治療的靶標(biāo)，值得進(jìn)一步研究。 第二部分 目的：探討HPV高、低危基因型感染宮頸組織標(biāo)本比較蛋白質(zhì)組學(xué)，找出差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)，鑒定與宮頸CA或?qū)m頸CIN發(fā)病相關(guān)的靶蛋白。 方法：應(yīng)用雙向凝膠電泳(2-DE)、質(zhì)譜分析和生物信息學(xué)等技術(shù)進(jìn)行HPV高、低危基因型感染人體組織后2-DE圖譜的差異比較，找出差異的蛋

7、白點(diǎn)，通過(guò)質(zhì)譜分析，得到PMF圖，再由Mascot軟件搜索NCBInr數(shù)據(jù)庫(kù)，找到相應(yīng)蛋白點(diǎn)的功能信息，分析其表達(dá)改變的意義。 結(jié)果：通過(guò)對(duì)CIN組、CA組分別和正常宮頸組織、CIN組和CA組兩兩比較，每組分別找到了47、63、39個(gè)差異蛋白點(diǎn)，共選26個(gè)差異倍數(shù)較大的蛋白點(diǎn)進(jìn)行分析，獲得了22張肽質(zhì)量指紋圖，軟件識(shí)別其有效肽片段峰后查詢數(shù)據(jù)庫(kù)，搜索后匹配到18個(gè)蛋白點(diǎn)，通過(guò)查詢NCBInr數(shù)據(jù)庫(kù)，獲得初步鑒定的18個(gè)蛋白質(zhì)的功