艾塞那肽對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠肝臟線粒體功能的影響.pdf

1、背景:
　　隨著現(xiàn)代生活方式的改變，肥胖已經(jīng)成為一個(gè)全球性的健康問(wèn)題，有研究顯示:肥胖人口在2015年已經(jīng)達(dá)到了7億。而肥胖與代謝綜合征之間也存在著明顯的相關(guān)性。大量研究證實(shí):包括非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、2型糖尿病、高血壓和高血脂等一系列疾病的代謝綜合征，它們的主要特征就是胰島素抵抗。然而，有研究顯示肝臟胰島素抵抗的發(fā)生前于全身胰島素抵抗，而肝臟受損的胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)可能是關(guān)鍵問(wèn)題。然而，肝臟脂質(zhì)沉積和胰島素抵抗可導(dǎo)致氧化

2、應(yīng)激，氧化應(yīng)激會(huì)影響肝臟線粒體的功能（如呼吸酶活性和ATP的生成），而當(dāng)線粒體發(fā)生異?；蚬δ苷系K時(shí)，又會(huì)反過(guò)來(lái)加重肝臟的脂質(zhì)沉積以及胰島素抵抗，從而形成了一個(gè)惡性循環(huán)。因此，提高胰島素的敏感性、減少肝臟脂質(zhì)的積累是至關(guān)重要的，也是防止肝臟遭受氧化應(yīng)激等“二次打擊”所必不可少的。
　　胰高血糖素樣肽(GLP)-1是一種腸促胰素，當(dāng)有食物攝入時(shí)，會(huì)刺激小腸L細(xì)胞釋放GLP-1，吸收入血的GLP-1可以通過(guò)葡萄糖依賴(lài)性的胰島素釋放調(diào)節(jié)血

3、液中的葡萄糖水平。據(jù)報(bào)道，GLP-1具有抑制胃排空，增加胃腸蠕動(dòng)，作用于大腦產(chǎn)生飽腹感，促進(jìn)β細(xì)胞增殖和降低血漿胰高血糖素濃度等有益的作用。艾塞那肽是GLP-1受體激動(dòng)劑。既往研究顯示，艾塞那肽對(duì)體脂起到了有益的影響，包括減少肥胖動(dòng)物模型的體重，通過(guò)減少食物攝入量和增加能量消耗減少肥胖者超重體重等。艾塞那肽的這些優(yōu)勢(shì)不同于其他的傳統(tǒng)的降糖藥，不僅能夠?qū)崿F(xiàn)血糖的穩(wěn)步控制，同時(shí)打破了糖尿病、肥胖和胰島素抵抗的這個(gè)惡性循環(huán)體系。因此，針對(duì)2型

4、糖尿病合并肥胖的患者，艾塞那肽更值得推薦使用。同時(shí)，隨著GLP-1受體在肝臟有表達(dá)的發(fā)現(xiàn)，許多研究表明，GLP-1在改善肝臟脂毒性中起著重要的作用，尤其是在糖尿病患者中。盡管有些研究已經(jīng)報(bào)道，艾塞那肽對(duì)肝臟胰島素抵抗和脂毒性有一定的有益作用，這可能跟其能夠影響氧化應(yīng)激和線粒體有關(guān)，但是艾塞那肽作用的潛在機(jī)制仍然是不清楚和存在爭(zhēng)議的。
　　目的:
　　1.明確艾塞那肽能否減輕高脂飲食誘導(dǎo)營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠的氧化應(yīng)激及其可能的機(jī)制。

5、
　　2.探索艾塞那肽能否減輕高脂飲食誘導(dǎo)的營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠的線粒體功能障礙。
　　3.明確艾塞那肽能否減輕高脂飲食誘導(dǎo)營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠的胰島素抵抗及其可能的機(jī)制。
　　方法:
　　1.動(dòng)物處理:本研究選用4周齡的雄性C57BL/6小鼠。在適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境后，將48只小鼠隨機(jī)分為普通飲食組(STD)和高脂飲食肥胖組(DIO)，分別喂養(yǎng)12周（造模期）。成模后，艾塞那肽（10ug/kg體重，每日兩次）或等量生理鹽水皮下注射

6、4周。小鼠隨機(jī)分為以下四組:STD(n=12)、STD+艾塞那肽(n=12)，DIO(n=12)和DIO+艾塞那肽(n=12)。
　　2.在小鼠應(yīng)用艾塞那肽治療前后分別進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)，腹腔胰島素耐量試驗(yàn)(IPITT)，每周測(cè)量體重并記錄。
　　3.在試驗(yàn)結(jié)束后，取血測(cè)血脂、肝功、糖化白蛋白(GA％)、血糖，用小鼠胰島素ELISA試劑盒測(cè)定胰島素水平。通過(guò)以下公式計(jì)算穩(wěn)態(tài)模型評(píng)估:HOMA-IR=[血糖(m

7、mol/L)×FINS(mIU/L)/22.5]。稱(chēng)量小鼠的肝臟重量、內(nèi)臟脂肪重（本研究應(yīng)用雙側(cè)附睪旁脂肪表示）并記錄。
　　4.通過(guò)蘇木精-伊紅(HE)染色、油紅O染色及透射電子顯微鏡觀察肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)、脂質(zhì)蓄積及超微結(jié)構(gòu)。
　　5.肝組織胰島素信號(hào)通路相關(guān)蛋白通過(guò)Westernblot檢測(cè)。
　　6.肝臟組織中丙二醛的含量通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物(MDA)測(cè)定試劑盒進(jìn)行定量測(cè)定，肝線粒體膜電位(△ψm)通過(guò)JC-1親脂性陽(yáng)

8、離子熒光探針測(cè)量熒光。
　　7.肝組織線粒體呼吸鏈(RC)酶活性通過(guò)酶-底物反應(yīng)來(lái)評(píng)估。
　　8.肝臟組織中的腺嘌呤核苷酸水平(AMP、ADP、ATP)通過(guò)高效液相色譜法（HPLC法）測(cè)定。能量電荷(EC)由以下公式計(jì)算EC=(ATP+ADP/2)/(ATP+ADP+AMP)，其中AMP，ADP，和ATP是各自組織中的濃度。
　　9.代謝評(píng)估:小鼠的機(jī)體代謝情況應(yīng)用TSEPhonMASTER動(dòng)物代謝測(cè)量分析系統(tǒng)（簡(jiǎn)稱(chēng)生

9、物代謝籠）。包括:食物和水的攝入量、體力活動(dòng)，二氧化碳生成量(VCO2)、耗氧量(VO2)、呼吸商(RQ)、產(chǎn)熱量和基礎(chǔ)代謝率(BMR)等全身代謝情況。
　　結(jié)果:
　　1.艾塞那肽降低高脂飲食誘導(dǎo)的營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠的體重增加量及肝臟脂肪含量
　　2.艾塞那肽降低高脂飲食誘導(dǎo)的營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠的OGTT、IPITT及胰島素抵抗。
　　3.艾塞那肽降低高脂飲食誘導(dǎo)的營(yíng)養(yǎng)性肥胖小鼠的氧化應(yīng)激，改善其線粒體結(jié)構(gòu)紊亂。