鋅alpha2糖蛋白減少營養(yǎng)性肥胖小鼠脂肪沉積的機(jī)制研究.pdf

1、第一部分羅格列酮對(duì)db/db小鼠脂肪組織鋅alpha2糖蛋白及線粒體生物合成相關(guān)因子表達(dá)的影響
　　目的：觀察db/db小鼠脂肪組織鋅alpha2糖蛋白（Zinc-alpha2-glycoprotein，ZAG）及線粒體生物合成相關(guān)因子的表達(dá)水平，探討羅格列酮對(duì)脂肪組織 ZAG及線粒體生物合成相關(guān)因子表達(dá)的影響。
　　方法：8周齡SPF級(jí)雄性db/m小鼠14只作為對(duì)照組，8周齡SPF級(jí)雄性db/db小鼠28只，隨機(jī)分為糖尿病

2、模型組和羅格列酮組，每組14只。羅格列酮組予以羅格列酮10mg/kg/day灌胃4周和8周，其余各組予以等體積生理鹽水灌胃4周和8周。每天測量小鼠飲水量，每3天測量小鼠攝食量，每周測小鼠空腹血糖及體重。于給藥4周末和8周末，分別處死小鼠。10％水合氯醛腹腔麻醉，眼球取血，分離血清，-20℃保存?zhèn)溆?。分離睪周及腎周脂肪組織，液氮速凍后-80℃保存。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）及Western-blotting技術(shù)，檢測小鼠內(nèi)臟脂

3、肪組織ZAG及線粒體生物合成相關(guān)因子過氧化物酶增殖型受體γ輔助活化因子1α（PGC-1α），核呼吸因子1（NRF-1），核呼吸因子2（NRF-2）及線粒體轉(zhuǎn)錄因子A（mtTFA）的表達(dá)水平。留取部分新鮮脂肪組織置于10%甲醛溶液HE染色，光鏡觀察。
　　結(jié)果:自發(fā)性糖尿病db/db小鼠的攝食量、飲水量、體重增加值、內(nèi)臟脂肪量、體脂比、血清空腹血糖（FBG）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、游離脂肪酸（FFA）水平均明顯高于非糖

4、尿病db/m小鼠。脂肪細(xì)胞體積明顯大于非糖尿病db/m小鼠，脂肪組織ZAG及線粒體生物合成相關(guān)因子PGC-1α、NRF-1、NRF-2、mtTFA mRNA和蛋白的表達(dá)均明顯低于非糖尿病db/m小鼠。羅格列酮干預(yù)db/db小鼠4周或8周后除血清TC水平無明顯變化外，上述其它指標(biāo)均有不同程度改善。
　　結(jié)論：羅格列酮可改善db/db小鼠的糖脂代謝，且能夠通過上調(diào)ZAG及線粒體生物合成相關(guān)因子PGC-1α、NRF-1、NRF-2、mt

5、TFA的mRNA和蛋白表達(dá)，減少內(nèi)臟脂肪積聚。
　　第二部分 ZAG對(duì)營養(yǎng)性肥胖小鼠脂肪組織線粒體生物合成相關(guān)因子表達(dá)的影響
　　目的：建立高脂喂養(yǎng)的營養(yǎng)性肥胖小鼠模型，觀察 ZAG過表達(dá)時(shí)肥胖小鼠脂肪組織線粒體生物合成相關(guān)因子的表達(dá)，探討ZAG與線粒體生物合成之間的關(guān)系。
　　方法：4周齡清潔級(jí)雄性C57BL/6小鼠43只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分成2組：普通飼養(yǎng)（Nomal food，NF）組10只和高脂飼養(yǎng)（Hig

6、h-fat food，HF）組33只。普通飼養(yǎng)組給予基礎(chǔ)飼料，高脂飼養(yǎng)組給予高脂飼料。每3天測一次體重及攝食量并記錄。飼養(yǎng)10周后對(duì)兩組小鼠體重進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，選擇高脂飼養(yǎng)組中造模成功的小鼠隨機(jī)分為3組：高脂飼養(yǎng)組、ZAG過表達(dá)組和空白質(zhì)粒組，每組10只，三組均給予高脂飼料喂養(yǎng)。營養(yǎng)性肥胖小鼠模型建立后進(jìn)行2周干預(yù)試驗(yàn)。ZAG過表達(dá)組予以pcDNA3.l(-)-mZAG質(zhì)粒25μg和lipofectamine2000脂質(zhì)體40μL混勻后小

7、鼠尾靜脈注射，空白質(zhì)粒組予以 pcDNA3.1(+)質(zhì)粒進(jìn)行尾靜脈注射，均隔日1次，共2周。干預(yù)兩周后小鼠處死，留取血清，生化法測定空腹血糖、血脂相關(guān)指標(biāo)，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定血清ZAG及游離脂肪酸（FFA）含量；留取附睪周圍脂肪組織稱重，取適量脂肪組織固定于10%甲醛溶液中，制成石蠟切片、HE染色；應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）及Western-blotting技術(shù)，檢測小鼠附睪周圍脂肪組織ZAG及線粒體生物合成相

8、關(guān)因子（PGC-1α、NRF-1、NRF-2及mtTFA）的表達(dá)。
　　結(jié)果:高脂飼養(yǎng)可致小鼠出現(xiàn)明顯腹型肥胖，體重增加，體脂比升高，血清空腹血糖（FBG）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、FFA水平均顯著升高，血清 ZAG水平下降，脂肪細(xì)胞體積增大，且睪周脂肪組織 ZAG及線粒體生物合成相關(guān)因子PGC-1α、NRF-1及mtTFA mRNA和蛋白的表達(dá)均明顯低于普通飼養(yǎng)組小鼠；ZAG過表達(dá)可使?fàn)I養(yǎng)性肥