人體頭發(fā)靶向脂質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)研究及在庫(kù)欣病中的應(yīng)用.pdf

1、人體頭發(fā)由于其采樣無(wú)創(chuàng)性、時(shí)序性、長(zhǎng)效性和易于保存等優(yōu)點(diǎn)，在疾病的長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)、疾病進(jìn)程和發(fā)病機(jī)制研究方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，越來越受到研究者的關(guān)注。已有頭發(fā)代謝組學(xué)技術(shù)應(yīng)用到疾病的診斷和發(fā)病機(jī)制的研究中，但相關(guān)研究報(bào)道還不多，因此，建立靈敏、可靠的頭發(fā)代謝組學(xué)分析技術(shù)，對(duì)于拓展頭發(fā)在疾病研究中的作用有著十分重要的意義。
　　本論文以頭發(fā)為研究對(duì)象，重點(diǎn)突破頭發(fā)前處理技術(shù)，充分富集不同類型內(nèi)源性化合物，建立涵蓋脂質(zhì)代謝、激素代謝網(wǎng)絡(luò)核心代謝

2、物的頭發(fā)靶向脂質(zhì)代謝組學(xué)分析技術(shù)，并應(yīng)用于罕見的庫(kù)欣病臨床頭發(fā)樣本，準(zhǔn)確、高效地分析頭發(fā)的代謝物輪廓，探索與疾病相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物，為臨床診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)提供無(wú)創(chuàng)的監(jiān)測(cè)指標(biāo)信息。
　　針對(duì)人體頭發(fā)中的脂質(zhì)化合物，優(yōu)化了頭發(fā)洗滌試劑、提取方法和片段長(zhǎng)度，建立了簡(jiǎn)便易行的前處理方法:采用植物香波-正己烷對(duì)頭發(fā)進(jìn)行洗滌，晾干后剪碎成5mm片段，采用氯仿-甲醇浸提法，從30mg頭發(fā)中同時(shí)提取鞘脂、甘油酯和甘油磷脂類化合物，采用高效液相色譜

3、-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用分析技術(shù)靶向表征頭發(fā)中鞘脂類化合物，并對(duì)檢測(cè)到的鞘脂類化合物進(jìn)行定量分析;采用高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)頭發(fā)甘油酯和甘油磷脂類化合物進(jìn)行表征，并對(duì)檢測(cè)到的脂類化合物同時(shí)進(jìn)行定量分析。對(duì)所建立的方法進(jìn)行了方法驗(yàn)證，對(duì)于鞘脂化合物，線性范圍為0.50-160pmol/mg或0.05-16pmol/mg，線性相關(guān)系數(shù)r值均大于0.99;定量限(LOQ)為0.05-0.50pmol/mg，檢測(cè)限(LOD)為0.012

4、5pmol/mg;日內(nèi)精密度均小于14.9％，日間精密度均小于16.7％，準(zhǔn)確度在80.2-119％之間，提取回收率在79.6-104％之間，基質(zhì)效應(yīng)在80.5-119％之間。對(duì)于甘油酯和甘油磷脂化合物，線性范圍為0.50-100pmol/mg，線性相關(guān)系數(shù)r值均大于0.99;定量限(LOQ)為0.50pmol/mg，檢測(cè)限(LOD)為0.125-0.25pmol/mg;日內(nèi)精密度均小于20.1％，日間精密度均小于17.3％，準(zhǔn)確度在8

5、0.0-120％之間，提取回收率在80.7-99.9％之間，基質(zhì)效應(yīng)在86.9-118％之間，驗(yàn)證結(jié)果表明所建立分析方法能夠滿足人體頭發(fā)中脂質(zhì)類化合物分析要求。將所建立的方法應(yīng)用于不同性別的人體頭發(fā)樣本，成功表征了32種鞘脂類化合物、72種甘油脂類化合物和2種甘油磷脂類化合物，并測(cè)定了含量，發(fā)現(xiàn)了性別相關(guān)的29種差異性化合物，并探究了頭發(fā)發(fā)干至發(fā)梢方向各類內(nèi)源性脂質(zhì)化合物含量的變化趨勢(shì)。
　　針對(duì)人體頭發(fā)中的激素化合物，優(yōu)化了洗滌

6、試劑、提取方法和片段長(zhǎng)度，建立了簡(jiǎn)單易行的前處理方法:采用植物香波-正己烷對(duì)頭發(fā)進(jìn)行洗滌，晾干后，剪碎成5mm片段，采用甲醇18小時(shí)浸提法，從30mg頭發(fā)中提取激素化合物。優(yōu)化了課題組已建立的血漿激素超高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用分析方法，增加激素化合物的分析通量由20種至28種。對(duì)所建立的激素分析方法進(jìn)行了方法驗(yàn)證，線性范圍為0.25-100pg/mg或0.05-20pg/mg，線性相關(guān)系數(shù)r值均大于0.99;定量限(LOQ)為0

7、.05-0.25pg/mg，檢測(cè)限(LOD)為0.05-0.1pg/mg;日內(nèi)精密度均小于17.9％，日間精密度均小于16.5％，準(zhǔn)確度在79.5-115％之間，提取回收率在77.1-106％之間，基質(zhì)效應(yīng)除醛固酮(127-134％)和17-OH PROG(67.6-72.％)外，其余化合物在81.5％-119％之間，方法驗(yàn)證結(jié)果表明所建立方法能夠滿足人體頭發(fā)中激素類化合物的表征和定量分析要求。將所建立的方法應(yīng)用于不同性別的人體頭發(fā)樣本

8、，成功表征了17種激素化合物，并測(cè)定了含量，發(fā)現(xiàn)了性別相關(guān)的5種差異性化合物，并探究了頭發(fā)發(fā)干至發(fā)梢方向激素化合物含量的變化趨勢(shì)。
　　本論文將所建立的頭發(fā)脂質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)應(yīng)用于庫(kù)欣病人與非庫(kù)欣病對(duì)照組臨床頭發(fā)樣本，在庫(kù)欣病人頭發(fā)中檢測(cè)到17種激素、33種鞘脂、100種甘油酯、4種磷脂，按照投影中的變量重要性值(VIP)大于1，并同時(shí)滿足T檢驗(yàn)具有顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)，共找到表征庫(kù)欣病人與非庫(kù)欣病對(duì)照組差異的40種潛在生物標(biāo)志物，包括