葉酸-殼聚糖載藥DAC影響SCC-9細(xì)胞p16基因甲基化狀態(tài)的意義.pdf

1、目的:研究葉酸偶聯(lián)殼聚糖攜帶5'-氮雜-2'-脫氧胞苻（5-aza-2deoxycytidine,地西他濱,DAC）納米粒對比5'-氮雜-2'-脫氧胞苷作用于體外培養(yǎng)的人鱗狀上皮舌癌SCC-9細(xì)胞,了解葉酸偶聯(lián)殼聚糖載藥DAC對SCC-9細(xì)胞的p16基因和p16蛋白的表達(dá)情況,及對SCC-9細(xì)胞的抑制作用,從而探索葉酸偶聯(lián)殼聚糖載藥納米粒攜DAC對細(xì)胞的p16基因的高甲基化狀態(tài)的還原能力的有效性,以及同時了解載藥系統(tǒng)對細(xì)胞提高藥效的能力

2、。
　　方法:合成葉酸殼聚糖載藥DAC納米粒,測其zeta電位證實其為穩(wěn)定的納米顆粒后,將SCC-9細(xì)胞分為0、1、2、3、4、5、6、7八組。2、3、4組選用三個梯度濃度1×10-7mol/L、1×10-6 mol/L、1×10-5mol/L的DAC進(jìn)行處理細(xì)胞,5、6、7組采用同樣三個濃度梯度1×10-7mol/L、1×10-6mol/L、1×10-5mol/L的葉酸殼聚糖載藥DAC納米粒處理細(xì)胞,0組為空白生理鹽水對照組,1

3、組為空白葉酸殼聚糖處理組,0組內(nèi)設(shè)3個濃度的組內(nèi)對照a、b、c,1組內(nèi)設(shè)3個組內(nèi)對照,為e、f、c組。觀察葉酸殼聚糖載藥DAC納米顆粒對比DAC作用細(xì)胞,用MTT法測各組藥物處理細(xì)胞5天內(nèi)的SCC-9細(xì)胞抑制率;藥物各自作用48小時后,實時熒光定量PCR法檢測細(xì)胞中p16基因mRNA的表達(dá)和應(yīng)用免疫組化SP法檢測細(xì)胞p16的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:MTT結(jié)果表明相同濃度的葉酸-殼聚糖載藥DAC納米顆粒組藥物對細(xì)胞的抑制率高于同樣濃度

4、下的DAC組(P＜0.05),且藥物對細(xì)胞的抑制率均與藥物濃度呈正相關(guān)關(guān)系。實時熒光定量PCR結(jié)果顯示2、3、4、5、6、7組的p16基因mRNA表達(dá)量顯著高于0、1組(P＜0.05)。0組和1組無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。相同濃度的葉酸-殼聚糖載藥DAC納米顆粒組的p16基因的mRNA表達(dá)量高于同樣濃度下的DAC組(P＜0.05);免疫組化結(jié)果顯示,2、3、4、5、6、7組相較于0、1組呈強(qiáng)陽性表達(dá),有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),相

5、同濃度的葉酸-殼聚糖載藥DAC納米顆粒組的p16蛋白的表達(dá)量高于同樣濃度下的DAC組并具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),0組和1組沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:1.葉酸-殼聚糖載藥納米粒攜帶DAC和DAC均對SCC-9細(xì)胞有明顯的去甲基化能力。
　　2.葉酸-殼聚糖載藥納米粒攜帶DAC對比DAC具有更高效逆轉(zhuǎn)SCC-9細(xì)胞p16基因甲基化狀態(tài),并具有促使p16基因mRNA和蛋白恢復(fù)表達(dá)的作用。
　　3.葉酸