蜂毒素對人膀胱癌T24細(xì)胞P16基因表達(dá)及甲基化的影響.pdf

1、　　目的：研究蜂毒素對人膀胱癌T24細(xì)胞P16基因表達(dá)及甲基化的影響,并探討其可能的機(jī)制。
　　方法：人膀胱癌T24細(xì)胞體外培養(yǎng),用MTT法檢測不同蜂毒素濃度(0、1、2、4、8、16和32μg/mL)處理(24h和48h)后其增殖變化,倒置顯微鏡觀察形態(tài)學(xué)變化。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期。RT-PCR檢測蜂毒素對T24細(xì)胞P16的mRNA的表達(dá)變化。Western blotting檢測蜂毒素對T24細(xì)胞P16的蛋白表達(dá)變化 (6

2、)甲基化特異性
　　PCR(MSP)法檢測蜂毒素對T24細(xì)胞P16基因5’端啟動子區(qū)CpG島甲基化的狀態(tài)。結(jié)果：使用4、8、16μg/mL蜂毒素處理人膀胱癌T24細(xì)胞24h及48h,蜂毒素能顯著抑制T24細(xì)胞的增殖,呈現(xiàn)劑量依賴性,但是隨著時間的延長,抑制效應(yīng)無明顯增強(qiáng)。倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)T24細(xì)胞密度呈劑量性減低,部分細(xì)胞出現(xiàn)漂浮,并可以觀察到細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變。用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期觀察到蜂毒素將T24細(xì)胞阻滯在S期,

3、呈現(xiàn)劑量依賴性。采用4、8、16μg/mL蜂毒素作用于人膀胱癌T24細(xì)胞24h ,RT-PCR檢測P16的mRNA的表達(dá)逐漸增加,呈現(xiàn)劑量依賴性。采用4、8、16μg/mL蜂毒素作用于人膀胱癌T24細(xì)胞24h ,用Western blotting檢測P16 的蛋白表達(dá)量逐漸增加,呈現(xiàn)劑量依賴性。采用4、8、16μg/mL蜂毒素作用于人膀胱癌T24細(xì)胞24h,用MSP檢測P16基因5’端啟動子區(qū)CpG島甲基化的狀態(tài),蜂毒素具有去甲基化作用