自噬在生精細(xì)胞中抑制外源基因表達(dá)及腮腺炎病毒復(fù)制中的功能.pdf

1、目的：外源基因在生精細(xì)胞中難以表達(dá)，腮腺炎病毒(mumps virus，MuV)不能在生精細(xì)胞中復(fù)制，提示生精細(xì)胞具有抵御外源基因及MuV感染的能力，但其機(jī)制并不清楚，本論文對此進(jìn)行了初步探討，重點(diǎn)研究了自噬在其中的作用。
　　材料與方法：分離C57雄性小鼠不同階段的生精細(xì)胞，利用表達(dá)熒光蛋白的腺病毒載體和腮腺炎病毒(mumps virus，MuV)感染生精細(xì)胞。實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測基因mRNA水平的表達(dá)，Western-bl

2、ot測定基因的蛋白表達(dá)水平，免疫組織化學(xué)與免疫熒光定位蛋白的分布。
　　結(jié)果：腺病毒熒光蛋白可以在Sertoli細(xì)胞、Leydig細(xì)胞及早期精原細(xì)胞中表達(dá)，但不能在圓形精子細(xì)胞中表達(dá)。自噬相關(guān)基因Beclin-1及LC3在生精細(xì)胞中高表達(dá)。雷帕霉素（Rapamycin，Rap）促進(jìn)細(xì)胞自噬后，可以抑制Sertoli細(xì)胞和Leydig細(xì)胞表達(dá)熒光蛋白;而3-甲基嘌呤(3-Methyladenine，3MA)抑制生精細(xì)胞自噬后，可以促