中介素對UUO大鼠模型間質(zhì)血管生成的影響.pdf

1、目的：
　　以大鼠單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)為腎間質(zhì)纖維化模型，觀察中介素（Intermedin IMD）對UUO大鼠模型間質(zhì)血管生成的影響。
　　方法：
　　(1)實(shí)驗(yàn)分組與造模：雄性Wistar大鼠72只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham組，n=24，行左輸尿管分離術(shù))、模型組(UUO,n=24)和IMD組(n=24)，后2組行左輸尿管結(jié)扎術(shù)。IMD組：在無菌條件下，將IMD8-47溶于200ul生理鹽水后注入微量滲透泵，

2、于大鼠背脊部皮下作一長約1cm橫切口，將泵植入，泵開口朝向鼠背前方，持續(xù)皮下給藥，劑量為100ng/(kg·h)，確保泵在皮下活動度好。各組大鼠分別于術(shù)后7d、14d、2ld和28d隨機(jī)選取6只，腹主動脈采血并留取梗阻側(cè)腎組織，之后處死。
　　(2)常規(guī)測定血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和胱抑素C(CysC)含量。
　　(3)HE和PAS染色評估腎小管間質(zhì)損傷程度。
　　(4)免疫組化法檢測血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分

3、子(CD31或 PECAM-1)、CD34、氨肽酶P(Aminopeptidase P, APP或JG-l2)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、VEGF受體-2(VEGFR2)和血管內(nèi)皮鈣粘蛋白(VE-cadherin)表達(dá)；
　　(5)實(shí)時(shí)定量PCR(Real Time-PCR)法檢測腎組織VEGF、VEGFR2和VE-cadherin mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　(1)血生化改變：與Sham組相比，不同時(shí)間點(diǎn)UU

4、O組大鼠血清BUN、Scr和CysC均升高(P<0.05)，在梗阻21d達(dá)高峰，之后降低；與UUO組相比，IMD組血清BUN、Scr和CysC均降低(P<0.05)。
　　(2)腎臟組織學(xué)改變：光鏡下顯示，Sham組大鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)清晰，腎小球結(jié)構(gòu)基本正常，腎小管上皮細(xì)胞完整，排列整齊。UUO組術(shù)后7d，間質(zhì)大量炎癥細(xì)胞浸潤，部分腎小管空泡變性；術(shù)后14d，炎癥細(xì)胞浸潤及細(xì)胞增殖明顯，成纖維細(xì)胞增生，部分小管結(jié)構(gòu)不完整，小管擴(kuò)張呈

5、囊狀，皮質(zhì)變?。恍g(shù)后21d，小管結(jié)構(gòu)消失，大量炎癥細(xì)胞浸潤及細(xì)胞增殖，間質(zhì)纖維化；術(shù)后28d，炎癥細(xì)胞浸潤有所減少，擴(kuò)張小管數(shù)量增多，部分小管萎縮消失，間質(zhì)纖維化明顯。PAS染色見腎小管基底膜彌漫性增厚，皺縮增多，系膜區(qū)增寬。與UUO組相比，IMD組炎細(xì)胞浸潤、腎小管損傷和纖維化程度較輕。腎小管間質(zhì)損傷評分：與Sham組相比，不同時(shí)間點(diǎn)UUO組大鼠損傷程度均升高(P<0.05)；與UUO組相比，IMD組損傷程度在21d、28d明顯減輕(

6、P<0.05)。
　　(3)腎臟微血管標(biāo)記物變化：與Sham組相比，不同時(shí)間點(diǎn)UUO組CD31、CD34、JG-12陽性表達(dá)均降低(P<0.05)；與UUO組相比，IMD組三者陽性表達(dá)均增多(P<0.05)。
　　(4)VEGF、VEGFR2 mRNA和蛋白的表達(dá)：與Sham組相比，不同時(shí)間點(diǎn)UUO組VEGF、VEGFR2 mRNA和蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05)；與UUO組相比，IMD組二者mRNA和蛋白表達(dá)水平升高(P

7、<0.05)。
　　(5)VE-cadherin mRNA和蛋白的表達(dá)：與Sham組相比，UUO組VE-cadherin mRNA由低于Sham組逐漸升高到超越Sham組，并在21d達(dá)到高峰，之后降低；不同時(shí)間點(diǎn)VE-cadherin蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05)。與UUO組相比，IMD組VE-cadherin mRNA表達(dá)量有增多趨勢；VE-cadherin蛋白表達(dá)水平升高(P<0.05)
　　結(jié)論：
　　IMD可