血管內(nèi)皮生長因子及其受體在單輸尿管結扎（UUO）大鼠腎間質(zhì)纖維化中的作用及科素亞對其影響.pdf

1、本課題建立大鼠單側輸尿管結扎誘發(fā)腎臟間質(zhì)纖維化實驗模型，分析腎臟間質(zhì)纖維化程度、腎臟間質(zhì)小血管密度和TGFβ1、內(nèi)皮細胞增殖等其他參數(shù)的改變，并探討腎小管血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）表達與PTC密度的相關性以及PTC密度和腎臟間質(zhì)纖維化程度的相關性。觀察科素亞在腎臟間質(zhì)纖維化中的作用，及在整體實驗觀察科素亞對腎臟VEGF表達的影響。 研究方法：本課題以體重為190-210克42只雄性SD大鼠為研究對象，隨機分為三組即UUO組(N

2、=16)、CG組(治療組，N=16)、SO(假手術組，N=10)，對UUO組和CG組大鼠進行單側輸尿管結扎，于麻醉條件下，用絲線結扎左側輸尿管中上段兩處并于中間剪斷，以防止結扎側腎臟沿輸尿管逆行感染，治療組用科素亞(40mg/Kg)于手術前1天灌胃直止手術當日，其它兩組用相同量的生理鹽水灌胃。假手術組(SO)，設對照觀察，手術方式同UUO，只是輸尿管不結扎。在手術后的第一周末和第二周末，對每組一半的大鼠在麻醉條件下進行處死，快速取出左腎

3、，去除被膜后稱重，經(jīng)處理用于形態(tài)學檢查。部分腎皮質(zhì)切成長3mm、寬3mm、厚1um小塊用0。25％戊二醛固定，用于電鏡檢查。其余腎組織用10％甲醛固定，用石蠟包埋，用于常規(guī)HE和Masson染色以及免疫組化染色。為了區(qū)分PTC內(nèi)皮細胞，用小鼠抗大鼠CD31單克隆抗體標定腎組織，為了觀察腎組織VEGF及其受體FLK-1的表達，用兔抗大鼠VEGF多克隆抗體和小鼠抗大鼠FLK-1多克隆抗體標定腎組織。為了觀察阻塞性腎臟病TGFβ1的表達及其改

4、變，用兔抗大鼠TGFβ1單克隆抗體表定腎組織。用Masson染色對腎臟間質(zhì)纖維化進行半定量分析。電鏡標本用日立H-7500透視電鏡觀察。 研究結果：UUO成型后，UUO組和CG組與S0組比左腎重量與體重比明顯增加，三組尿蛋白和血肌酐無明顯差異，UUO組及CG組出現(xiàn)腎小管擴張、間質(zhì)炎癥細胞浸潤和腎臟間質(zhì)纖維化，UUO組與SO組比腎臟間質(zhì)纖維化分級有顯著性差異(P＜0.05)；CG組與SO組比有顯著性差異(P＜0.05)；CG組與U

5、UO組比腎臟纖維化輕，有顯著性差異(P＜0.05)。隨著梗阻時間的延長在小管間質(zhì)部位，UUO組及CG組與SO組比VEGF的表達減少，有顯著性差異(p＜0.05)；UUO組及CG組與SO組比，PTC的密度減少，有顯著性差異；CG組與CG組比，VEGF表達及PTC密度無顯著性差異(P＞0.05)；UUO組與CG組比腎小管TGFβ1增加有顯著性差異。腎小管VEGF表達與腎臟間質(zhì)PTC密度呈正相關(r=0.9915，P＜0.0001)，腎臟間質(zhì)