加味抵擋湯對(duì)UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響及作用機(jī)制.pdf

1、目的： 通過(guò)觀察加味抵擋湯對(duì)單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠血漿中組織型纖溶酶原激活物(t—PA)、纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)及腎組織中a—平滑肌肌動(dòng)蛋白(a—SMA)、PAI-1表達(dá)的影響，探討其阻緩腎間質(zhì)纖維化的機(jī)制。 方法： 將48只wistar大鼠隨機(jī)分為4組，每組12只。模型組、貝那普利組、加味抵擋湯組，用2％戊巴比妥鈉按30mg/kg，腹腔注射麻醉后將大鼠固定、去毛備皮，打開(kāi)腹腔結(jié)扎左輸尿管后逐層縫合切

2、口。自結(jié)扎日起三天每天肌注青霉素8萬(wàn)單位/只預(yù)防感染。假手術(shù)組：同樣處理但不結(jié)扎，生理鹽水灌胃1.8ml/只/天。模型組予生理鹽水灌胃1.8ml/只/天。貝那普利組予貝那普利溶液1.8ml/只/天，加味抵擋湯組予中藥液1.8ml/只/天。第14天摘眼球取血，送湖北中醫(yī)院檢驗(yàn)科測(cè)血肌酐、尿素氮、t—PA、PAI-1含量。頸椎脫臼處死大鼠，留取梗阻側(cè)腎標(biāo)本，置于10％中性甲醛固定液中保存，以作病理檢查。 腎組織切片后行HE、Mass

3、on染色，高倍鏡下(×400)觀察腎間質(zhì)纖維化程度。用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)腎組織中a—SMA、PAI-1的表達(dá)。 結(jié)果： 1．腎功能的測(cè)定與假手術(shù)組相比較，其余三組Scr均升高，經(jīng)加味抵擋湯和貝那普利治療后，下降不明顯(p＞0．05)，而B(niǎo)UN檢測(cè)顯示，與假手術(shù)組比較，其余三組BUN均明顯上升(P＜0.05)，但與模型組比較，中藥組與貝那普利組均有明顯下降(P＜0．05)，兩治療組之間比較，無(wú)明顯差別(P＞0．05)。

4、即經(jīng)過(guò)治療后，對(duì)Scr影響不明顯，對(duì)BUN有較明顯的影響。 2．腎臟病理 肉眼觀察可見(jiàn)：假手術(shù)組大鼠腎臟顏色暗紅，大小形態(tài)正常。模型組，中藥組及貝那普利組大鼠結(jié)扎側(cè)腎臟顏色淡，腫大明顯，有囊性感，內(nèi)存黃褐色混濁液體，腎盂明顯擴(kuò)張，皮質(zhì)變薄。光鏡下可見(jiàn)：HE染色顯示假手術(shù)組偶見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞空泡變性，灶狀單核細(xì)胞浸潤(rùn)，模型組可見(jiàn)彌漫的腎小管上皮細(xì)胞空泡變性，部分管腔內(nèi)有蛋白或細(xì)胞管型部分腎小管擴(kuò)張、萎縮，偶見(jiàn)壞死，炎性細(xì)胞

5、浸潤(rùn)明顯，腎皮質(zhì)變薄，加味抵擋湯和貝那普利組病變較模型組減輕。 3．腎間質(zhì)纖維Masson染色面積模型組可見(jiàn)間質(zhì)大量藍(lán)染膠原纖維增生，腎小球病變不明顯。中藥組、貝那普利組腎間質(zhì)膠原纖維陽(yáng)性染色面積較模型組均明顯下降(P＜0．05)，兩治療組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 4．血漿t—PA、PAI-1的測(cè)定加味抵擋湯組t—PA明顯高于模型組(P＜0．05)，而低于假手術(shù)組(P＜0.05)，與貝那普利組無(wú)顯著差異

6、，加味抵擋湯組PAI-1含量明顯低于模型組(p＜0．01)且高于假手術(shù)組。 5．各組腎組織a—SMA的表達(dá)與假手術(shù)組比較，其余三組a—SMA的表達(dá)呈顯著性升高(P＜0.01)，經(jīng)加味抵擋湯和貝那普利治療后，下降明顯(p＜0．05)。假手術(shù)組僅血管壁平滑肌細(xì)胞呈陽(yáng)性表達(dá)，腎小球和腎小管上皮細(xì)胞無(wú)明顯著色。模型組表達(dá)部位以腎間質(zhì)為主，主要圍繞在萎縮或擴(kuò)張的腎小管周?chē)袄w維化的腎間質(zhì)中。中藥組和貝那普利組可見(jiàn)散在于纖維化的腎間質(zhì)處有少

7、量表達(dá)。 6．各組腎組織PAI-1的表達(dá)PAI-1在假手術(shù)組腎組織中僅在血管和少數(shù)腎小管上皮細(xì)胞上表達(dá)，腎小球無(wú)明顯表達(dá)。在模型組，PAI-1表達(dá)面積明顯增加，加味抵擋湯組表達(dá)較模型組明顯減弱，與貝那普利組相當(dāng)。 結(jié)論： 本研究表明：加味抵擋湯具有阻緩腎間質(zhì)纖維化的作用。其作用機(jī)制可能是提高uuo大鼠的纖溶活性，維持腎間質(zhì)正常血循環(huán)，防止腎缺血所產(chǎn)生的間質(zhì)性腎炎，抑制腎組織a—SMA、PAI-1蛋白表達(dá)，抑制腎小