活性維生素D3對UUO大鼠腎組織中ILK表達的影響.pdf

1、目的：動態(tài)觀察活性維生素D3對腎間質(zhì)纖維化過程中ILK、TGF-β1、E-鈣粘素表達的影響，探討活性維生素D3對UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響及其機制。
　　方法：雄性清潔級SD大鼠96只，6周齡，體重180～220g，普通喂養(yǎng)，隨機分4組：正常對照組24只，假手術組24只、單側輸尿管（UUO）梗阻大鼠模型組24只、活性維生素D3干預組24只，UUO模型是指行開腹手術后，游離左側輸尿管，在靠近左腎下極處結扎輸尿管,UUO模型組、活性

2、維生素D3干預組建立UUO動物模型；假手術組是指行開腹手術，僅游離左側輸尿管，不結扎；對照組不做特殊處理；干預組是在大鼠UUO模型建立后當天，將活性維生素D30.5ug溶于1ml花生油中灌胃，每天一次直至14天，正常對照組、模型組及假手術組給予每天1ml花生油灌胃。手術后第1天、3天、7天、14天天各處死6只大鼠，各組大鼠處死后均取左側腎臟，腎組織分為兩份，一份于10％甲醛溶液固定，一份于液氮中儲藏。腎組織經(jīng)HE以及Masson染色后在

3、光鏡下觀察腎小管間質(zhì)損害及腎間質(zhì)纖維化并進行病理分級，計算積分平均數(shù)。免疫組化檢測腎組織中ILK、TGF-β1、E-鈣粘素的表達陽性細胞的面積及染色強度，計算各組平均積分值，并分析ILK、TGF-β1、E-鈣粘素的表達與腎間質(zhì)纖維化的相關性。RT-PCR方法在分子水平檢測梗阻側腎組織中ILKmRNA的表達水平。
　　結果:HE染色及Masson染色結果：與對照組、假手術組比較，模型組腎間質(zhì)明顯增寬，纖維化明顯，炎細胞明顯增多；與U

4、UO模型組相比，維生素D3干預組腎間質(zhì)增寬不明顯，纖維化程度弱，炎細胞數(shù)量少，病理積分差異具有統(tǒng)計學意義（p<0.05），與對照組比較，假手術組炎細胞增多，病理損害加重，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；免疫組化結果：與對照組相比，UUO模型組ILK陽性表達面積顯著增加（P<0.01）；TGF-β1表達增加（P<0.05），E-鈣粘素表達減少（P<0.05），與UUO模型組比較，維生素D3干預組ILK表達減少（P<0.05），TGF-β

5、1表達減少（P<0.05）；E-鈣粘素表達增加（P<0.05），ILK在腎小管間質(zhì)中的表達增加，病理損傷程度與ILK呈正相關關系（r=0.960p<0.01）；E-ca在小管間質(zhì)中的表達逐漸減少，病理損傷程度與E-ca呈負相關關系（r=-0.833p<0.01）；TGF-β1在小管間質(zhì)中的表達逐漸增加，病理損傷程度與TGF-β呈正相關關系（r=0.806p<0.01）。RT-PCR結果:與對照組相比，UUO模型組ILKmRNA水平表達顯