活性維生素D3對(duì)糖尿病腎病大鼠TGF-β1及相關(guān)因子調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的:探索活性維生素D3對(duì)不同轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(Transforming Growth Factor-β1，TGF-β1)表達(dá)水平的糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)大鼠腎臟纖維化的保護(hù)作用及可能機(jī)制。
　　方法:建立Sprague-Dawley(SD)大鼠糖尿病腎病模型(n=36)，分別注射三種不同慢病毒，同時(shí)給予骨化三醇(0.03ug·kg-1·d-1)干預(yù)及花生油對(duì)照，隨機(jī)分為①TGF-β1過(guò)表達(dá)

2、+VD組;②TGF-β1過(guò)表達(dá)+花生油組;③干擾TGF-β1+VD組;④干擾TGF-β1+花生油組;⑤空載體+VD組;⑥空載體+花生油組。37天后采集標(biāo)本，檢測(cè)其血肌酐、尿素氮水平。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)方法檢測(cè)大鼠腎臟TGF-β1、PTEN(人第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因，gene of phosphate and tension homology deleted on chromosome ten,

3、PTEN)、膠原蛋白1(collagen-1，COL-1)、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(Connective Tissue Growth Factor，CTGF)和內(nèi)皮素-1(endothelin-1，ET-1) mRNA的表達(dá)水平，用蛋白質(zhì)印跡(westernblot)、免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大鼠腎臟TGFβ1、ET-1蛋白水平。通過(guò)電鏡動(dòng)態(tài)觀察大鼠腎臟超微結(jié)構(gòu)的變化及活性維生素D3干預(yù)的效果。通過(guò)HE及MASSON染色觀察大鼠腎小球、腎小管及腎

4、間質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化及活性維生素D3干預(yù)的效果。
　　結(jié)果:
　　(1)不同的病毒載體，可形成有梯度的腎臟TGF-β1表達(dá)水平。并據(jù)此把大鼠分為T(mén)GF-β1過(guò)表達(dá)組（過(guò)量表達(dá)TGF-β1），空載體組（正常表達(dá)TGF-β1）和干擾組（低表達(dá)TGF-β1）。TGF-β1表達(dá)越高的大鼠，腎臟受損更加嚴(yán)重:HE和電鏡圖片示腎臟病理改變?cè)龆?腎臟間質(zhì)纖維化（MASSON染色）加重;血漿肌酐和BUN更高。
　　(2)活性維生素D3干預(yù)可

5、改善各組大鼠腎臟病變:使TGF-β1過(guò)表達(dá)、TGFβ1干擾組和空載體組大鼠腎臟TGF-β1、COL-1、CTGF mRNA表達(dá)均明顯下調(diào)(均P＜0.05)，使PTEN mRNA表達(dá)上調(diào)(P＜0.05)，腎臟TGF-β1、ET-1mRNA及蛋白(western和免疫組化)的表達(dá)均有顯著性下調(diào);HE和電鏡圖片顯示腎臟病理改善，纖維化減少（MASSON染色），肌酐和BUN降低（均P＜0.05）。
　　結(jié)論:(1)糖尿病腎病環(huán)境下TGF-