DNA損傷劑對(duì)攜帶BRCA1的RING和BRCT功能區(qū)位點(diǎn)突變的乳腺癌細(xì)胞系毒性損傷反應(yīng)的研究.pdf

1、目的:比較攜帶乳腺癌易感基因1(BRCA1)RING和BRCT兩個(gè)功能區(qū)位點(diǎn)突變的乳腺癌細(xì)胞系(HCC1937)對(duì)不同類型DNA損傷劑毒性損傷的敏感性，目的在于探討B(tài)RCA1的RING和BRCT兩個(gè)功能區(qū)在DNA損傷應(yīng)答中的作用。
　　方法:選擇BRCA1的RING功能區(qū)與腫瘤發(fā)生相關(guān)的突變位點(diǎn)C64G以及BRCT功能區(qū)與腫瘤形成相關(guān)的突變位點(diǎn)P1749R進(jìn)行探究，通過(guò)BRCA1缺欠的HCC1937細(xì)胞系，建立穩(wěn)定表達(dá)C64G位點(diǎn)

2、突變(C64G)及P1749R位點(diǎn)突變(P1749R)、野生型BRCA1(wtBRCA1)、空載體空白對(duì)照(vector)四種細(xì)胞系。應(yīng)用Western-blot技術(shù)檢測(cè)四種細(xì)胞系的BRCA1蛋白表達(dá)。對(duì)四組細(xì)胞系分別行電離輻射（Ionizing Radiation，IR，一次性分別給予2、4及6Gy劑量的X射線）、絲裂霉素C(Mitomycin C，MMC，分別與0.2、1及5μg/ml劑量的MMC孵育1h)以及紫外線(Ultravi

3、olet，UV，分別給予2、4及6J/m2劑量的UV)處理，每種處理均設(shè)置未處理對(duì)照組。通過(guò)3H-TdR摻入試驗(yàn)、MTT實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)，研究細(xì)胞3H-TdR摻入率和細(xì)胞存活的變化，用以比較BRCA1兩個(gè)功能區(qū)位點(diǎn)突變對(duì)細(xì)胞應(yīng)答DNA損傷劑反應(yīng)的影響。
　　結(jié)果:首先通過(guò)HCC1937細(xì)胞系成功建立表達(dá)C64G、P1749R、wtBRCA1以及vector的四種細(xì)胞系，通過(guò)Western-blot檢測(cè)蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示C64

4、G、P1749R以及wtBRCA1的表達(dá)量基本一致，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有可比性。3H-TdR摻入實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組相比較，發(fā)現(xiàn)四種細(xì)胞分別在不同劑量IR、MMC以及UV處理后，3H-TdR的摻入率均下降，差異具有顯著性(P＜0.05)，而且四種細(xì)胞系3H-TdR的摻入率與暴露劑量呈負(fù)相關(guān)。MTT以及細(xì)胞克隆形成兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果還提示，與表達(dá)wtBRCA1細(xì)胞比較，表達(dá)C64G、P1749R以及vector細(xì)胞的細(xì)胞存活率均降低，差異

5、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中表達(dá)C64G與P1749R細(xì)胞的細(xì)胞存活率與vector細(xì)胞的變化基本一致。進(jìn)一步對(duì)表達(dá)C64G與P1749R細(xì)胞的克隆形成率及細(xì)胞存活的比較，還發(fā)現(xiàn)C64G細(xì)胞對(duì)IR、MMC及其UV損傷反應(yīng)的敏感性高于P1749R細(xì)胞，且兩者比較的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:(1)BRCA1的RING和BRCT功能區(qū)的位點(diǎn)突變均可導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)IR、MMC以及UV所致的DNA損傷敏感性增高，且