人乳腺癌細(xì)胞BRCA1對hTERT基因表達(dá)的調(diào)控研究.pdf

1、乳腺癌(breastcancer)是婦女最常見的惡性腫瘤之一。近20年來其發(fā)病率呈明顯上升趨勢，嚴(yán)重危害婦女的身心健康。既往研究表明端粒酶激活與乳腺癌的早期生成密切相關(guān)。作為人端粒酶最核心成分人端粒酶催化亞單位hTERT(humantelomerasereversetranscriptase)是調(diào)節(jié)端粒酶活性的限速步驟，因此研究hTERT轉(zhuǎn)錄調(diào)控有助于揭示乳腺癌部分發(fā)生機(jī)制。乳腺癌易感基因BRCA1是近來發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因。大量研究證明

2、，BRCA1基因結(jié)構(gòu)、功能異常不僅與遺傳性乳腺癌的發(fā)生密切相關(guān)，與部分散發(fā)性乳腺癌的發(fā)生關(guān)系也很密切。近來有許多學(xué)者在研究腫瘤細(xì)胞hTERT上游E-box位點(diǎn)突變時推測BRCA1與hTERT轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)。但在乳腺癌中BRCA1基因是否參與hTERT轉(zhuǎn)錄調(diào)控及其相關(guān)機(jī)制目前仍不明確。 本研究分析人乳腺癌和癌旁組織中hTERTmRNA和BRCA1蛋白表達(dá)及二者之間的表達(dá)關(guān)系，觀察外源性BRCA1基因轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞強(qiáng)制表達(dá)后對hT

3、ERT蛋白表達(dá)的影響，以了解人乳腺癌組織中BRCA1蛋白對hTERTmRNA轉(zhuǎn)錄調(diào)控及對hTERT蛋白表達(dá)的影響，為進(jìn)一步深入研究BRCA1對hTERT的調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 采用RT-PCR和免疫組化分別檢測43例乳腺癌患者和40例乳腺癌癌旁組織中的hTERTmRNA和BRCA1蛋白的表達(dá)；在體外實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用脂質(zhì)體將BRCA1真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至乳腺癌MCF-7細(xì)胞中強(qiáng)制表達(dá)，WesternBlot檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞中hTERT蛋白表達(dá)的

4、變化。噻唑藍(lán)比色試驗(yàn)(MTT)觀察BRCA1真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞后細(xì)胞增殖活性的變化。 結(jié)果表明：41例乳腺癌組織中，30例檢測出hTERTmRNA陽性，陽性率75.0％；而40例癌旁組織中只有2例檢測出hTERTmRNA表達(dá)陽性，陽性率5.0％，在乳腺癌和癌旁組織中hTERTmRNA表達(dá)具有顯著差異(卡方檢驗(yàn)p＜0.05)。在41例乳腺癌標(biāo)本中，檢測出BRCA1蛋白陽性15例，陽性率34.8％；而在40例癌旁組織中3

5、1例檢測出BRCA1蛋白陽性，陽性率77.5％。BRCA1蛋白的表達(dá)在兩組間也有顯著的差異(卡方檢驗(yàn)p＜0.05)。并且在乳腺癌組織中hTERTmRNA的高表達(dá)和BRCA1蛋白的低表達(dá)有著明顯的相關(guān)性(p＜0.05)。體外實(shí)驗(yàn)中，將pcDNA3.1-BRCA1真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MCF-7乳腺癌細(xì)胞株后，WesternBlot結(jié)果發(fā)現(xiàn)BRCA1蛋白表達(dá)明顯增加，同-4-時hTERT蛋白表達(dá)受到明顯抑制。噻唑藍(lán)(MTT)比色法觀察轉(zhuǎn)染后的MC