基于16SrRNA基因的食源性致病菌的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)研究.pdf

1、近年來(lái)食品安全事件頻發(fā)使得食品安全已經(jīng)成為了全民關(guān)注的共同話題。食品安全問(wèn)題成為關(guān)系到各個(gè)層次的人的民生問(wèn)題，而在各類(lèi)食品安全事件中，由食源性致病菌引起的食物中毒是食品安全問(wèn)題的主要方面。
　　最常見(jiàn)的食源性致病菌有志賀氏菌(Shigella)、沙門(mén)氏菌(Salmonella)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等。目前國(guó)內(nèi)對(duì)食源性致病菌的檢測(cè)方法主要沿用傳統(tǒng)的細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定法，其檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜瑣碎，耗時(shí)

2、太長(zhǎng)，不僅靈敏度不高，且每次只能確定或排除一種病原菌，難以滿(mǎn)足對(duì)食源性致病菌快速準(zhǔn)確檢測(cè)的需要。因此，建立一種多重、快速、高效的檢測(cè)技術(shù)是十分必要的。
　　本研究利用TaqMan探針技術(shù)建立了針對(duì)志賀氏菌(Shigella)、沙門(mén)氏菌(Salmonella)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)這三種主要食源性致病菌的多重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)技術(shù)。利用16SrRNA基因作為靶基因設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物和Taq

3、Man探針，引物和探針雙重控制靶基因的選擇，具有很好的特異性和靈敏度。研究結(jié)果：
　?。?）選取細(xì)菌16SrRNA基因作為靶基因，設(shè)計(jì)PCR引物，以志賀氏菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌三種菌為目標(biāo)菌，六種菌為對(duì)照菌，通過(guò)普通PCR擴(kuò)增及測(cè)序驗(yàn)證，該引物可以作為兼并引物用于進(jìn)一步研究。
　?。?）優(yōu)化建立針對(duì)單一細(xì)菌基因檢測(cè)的單一實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)體系，在單一實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)體系的基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化建立了三重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)體