利奈唑胺對紅霉素耐藥腸球菌的作用.pdf

1、腸球菌（Enterococcus）是人類腸道中的正常菌群，它不僅對多種抗生素固有耐藥，還具有強(qiáng)大的獲得性耐藥的能力。多重耐藥的腸球菌感染治療困難，急需尋找新的藥物療法。在前期研究中，我們發(fā)現(xiàn)，對紅霉素高度耐藥的腸球菌在體外誘導(dǎo)對利奈唑胺耐藥的過程中，菌株對紅霉素變敏感。我們推測，紅霉素和利奈唑胺之間可能存在某些不相容的作用，兩者合用可能產(chǎn)生協(xié)同或者拮抗作用。Michael T. Sweeney等曾報(bào)道利奈唑胺和紅霉素聯(lián)合應(yīng)用于肺炎鏈球菌

2、感染可產(chǎn)生協(xié)同作用，但這種藥物組合在腸球菌上是否也具有協(xié)同作用未見報(bào)道。此外，腸球菌對紅霉素存在高度耐藥主要是通過獲得ermB基因，而腸球菌中ermB基因一般由具有高移動(dòng)性的轉(zhuǎn)座子Tn1545攜帶。我們推測，腸球菌對紅霉素變敏感可能跟 ermB基因有關(guān)。
　　目的：
　　探討紅霉素和利奈唑胺合用對腸球菌感染的作用，以及腸球菌體外誘導(dǎo)對利奈唑胺耐藥的過程中對紅霉素變敏感的可能機(jī)制。
　　方法：
　?、艑⑴R床分離得到

3、的7株腸球菌在體外經(jīng)微量肉湯稀釋法測定MIC后，用1/2 MIC利奈唑胺誘導(dǎo)至耐藥，微量稀釋法測定誘導(dǎo)后菌株對利奈唑胺、紅霉素的MIC。⑵棋盤稀釋法、時(shí)間-殺菌試驗(yàn)和小鼠體內(nèi)試驗(yàn)驗(yàn)證利奈唑胺和紅霉素聯(lián)用對腸球菌的作用。⑶PCR檢測耐藥前后菌株ermB甲基化基因和Tn1545轉(zhuǎn)座子；并用hiTAIL-PCR法擴(kuò)增ermB的周圍序列。⑷Real-Time PCR法檢測ermB甲基化基因在菌株中的表達(dá)情況，并分別加入0.5μg/ml利奈唑胺和

4、紅霉素，探討對ermB基因的表達(dá)的影響。⑸引物延伸法檢測菌株23S rRNA上A2071位點(diǎn)的甲基化水平。⑹通過濾膜接合試驗(yàn)檢測Tn1545轉(zhuǎn)座子在菌株間的接合能力。
　　結(jié)果：
　　①經(jīng)過42天的誘導(dǎo)，糞腸球菌對利奈唑胺的 MIC都達(dá)到了64μg/ml，而屎腸球菌的MIC仍保留在4或8μg/ml。在菌株對利奈唑胺達(dá)到中介耐藥時(shí)，有5株腸球菌對紅霉素突然變?yōu)槊舾校∕IC<2μg/ml）。②棋盤稀釋法中，全部14株菌有12株F

5、IC≤0.5，顯示協(xié)同作用，其余兩株FIC=0.51，顯示相加作用。此外，時(shí)間-殺菌試驗(yàn)和小鼠體內(nèi)試驗(yàn)也都顯示利奈唑胺和紅霉素聯(lián)合用藥在腸球菌上具有協(xié)同作用。③對紅霉素高度耐藥的腸球菌攜帶ermB甲基化基因和Tn1545轉(zhuǎn)座子，ermB基因位于Tn1545上，在菌株對紅霉素變敏感之后，ermB基因和Tn1545轉(zhuǎn)座子也隨之消失。④糞腸球菌ermB基因表達(dá)遠(yuǎn)低于屎腸球菌，尤其是糞腸球菌B1232和8139，但在加入0.5μg/ml的紅霉素

6、后，這兩株菌的ermB基因表達(dá)分別上調(diào)了905和791倍；其它菌株在紅霉素和利奈唑胺作用下，ermB基因表達(dá)有所上升。⑤引物延伸法顯示，所有菌株的 A2071位點(diǎn)均有甲基化，糞腸球菌的甲基化程度相對較弱。但當(dāng)菌株在利奈唑胺誘導(dǎo)耐藥后，所有菌株的A2071位點(diǎn)甲基化均消失。
　　結(jié)論：
　?、爬芜虬泛图t霉素聯(lián)合用藥對腸球菌感染存在協(xié)同作用。⑵紅霉素高度耐藥腸球菌在利奈唑胺誘導(dǎo)下，ermB甲基化基因和Tn1545轉(zhuǎn)座子丟失，對